Rövid leírás
1 2 ÁLLATI KUTATÁSRA VONATKOZÓ AJÁNLOTT ELJÁRÁSOK 3 AJÁNLOTT ELJÁRÁSOK KÉZIKÖNYVE.
Leírás
ÁLLATOKKAL VÉGZETT AJÁNLOTT ELJÁRÁSOK KÉZIKÖNYVE
ÁLLATOKKAL VÉGZETT AJÁNLOTT ELJÁRÁSOK KÉZIKÖNYVE MVZ M. en C. Jaime Alonso Navarro Hernández MVZ Roberto Aarón Ramírez Ojeda MVZ Carlos Villagrán Vélez
TÁRGYMUTATÓ ELŐSZÓ DR. LUTZ ALEXANDER KEFERSTEIN CABALLERO | 11 ELSŐ RÉSZ: BEVEZETÉS 1.1 Tudományos kutatás | 16 1.2. Az állatok kísérletekben való felhasználásának eredete | 17 MÁSODIK RÉSZ: A TERVEZÉS ELŐTT MÓDSZERTANI ÉS ETIKAI SZEMPONTOK 2.1 A terület és az érdekes téma kiválasztása | 21 2.2 A tanulmány megvalósíthatóságának meghatározása | 25 2.3 Kutatási jegyzőkönyv | 26 2.4 A kutatási kérdés | 29 3. A VIZSGÁLATI JEGYZŐKÖNYV FEJLESZTÉSE | 30 3.1 A projekt címe 30 3.2 A projekt indoklása | 30 3.2.1. Problémamegállapítás | 31 3.2.2 Elméleti keret | 32 3.2.2.1. Szisztematikus felülvizsgálat | 33 3.2.2.2 Szisztematikus felülvizsgálatok szükségessége | 34 3.2.3 Az állatok kutatásban, oktatásban és tesztelésben való felhasználásának indoklása 34 3.3 Kutatási célok | 36 3.4 Hipotézis megfogalmazása | 37 4. AZ EGYETLEN ELVEK MEGFELELÉSE AZ ÁLLATOKKAL KÍSÉRLETEKBEN | 40 4.1. Az állatok cseréje kísérletekben, számuk csökkentése és a technika finomítása | 43 4.2 Jogi ellenőrzések, valamint etikai és tudományos indoklások 45 4.3 Csökkentő alternatívák helyiségei | 44 4.4 Helyszín finomítási alternatívákhoz 45 4.5 Helyettesítő alternatívák helyiségei | 46 4.6 Oktatás és képzés | 46
NEGYEDIK RÉSZ: ÁLLATOK ÁPOLÁSA ÉS FELHASZNÁLÁSA 17. AZ ÁLLATOK KÖRNYEZETE ÉS KEZELÉSE: NEM KÍSÉRLETI VÁLTOZÓ | 129 17.1 Fizikai tényezők | 130 17.1.1. Doboz kialakítása | 130 17.1.2 Hőmérséklet és páratartalom | 130 17.1.3 Szellőzés | 131 17.1.4 Fény | 132 17.1.5 Zaj | 133 17.1.6. Szekrények tartozékai 133 17.1.7. Doboz mérete és elhelyezett állatok száma | 134 17.1.8 Szállítás | 134 17.1.9 Működés | 134 17.2 Kémiai tényezők | 135 17.2.1 Élelmiszer és víz | 136 17.2.2 Kábítószer | 136 17.3 Mikrobiológiai tényezők | 137 17.3.1 Bakteriális betegségek | 137 17.3.2 Vírusos betegségek | 138 17.3.3 Parazita betegségek | 138 18. ÁLTALÁNOS IRÁNYMUTATÁSOK AZ ÁLLATOK ALKALMAZÁSÁRA VONATKOZÓ KÍSÉRLETI JEGYZŐKÖNYVEK FELÜLVIZSGÁLATÁBAN
DEDIKÁCIÓK AARÓN Növelőmnek, Marlene-nek és Fausto-nak. JAIME Anyám és tanárom: Hernández Adelita Mendieta. CARLOS Mariana lányomnak, életem legfontosabb lényének, lelkemnek, amely bátorít!
A tények, vagyis a tények és nem a fogalmak világához kapcsolódó kérdések értelmében.
Ebből az alapvető képességből világosan kiderül, az emberi lény etikai és esztétikai képességeit levezeti - vagy legalábbis annak lehetőségét feltételezi -. 3 KANT, I., Mutmaßlicher Anfang der Menschengeschichte (MAMG), AA. VIII o. 111 4 KANT, I., Vö. Kritik der praktischen Verunft (K.p.V)., AA V, p. 74. 5 Az eredetiben: "Nun findet der Mensch in sich wirklich ein Vermögen, dadurch er sich von allen andern Dingen, ja von sich selbst, so fern er durch Gegenstände afficirt wird, unterscheidet, und das ist die Vernunft". KANT, I., Grundlegung zur Metaphysic der Sitten (GMS), AA IV, p. 452.
KANT, I. Anthopologie in pragmatischer Hinsicht (APH), AA VII, 42. §, pp. 197-199. Grapevine: SCHOPENHAUER, Arthur, Die Welt als Willen und Vorstellung I (I. világháború), en Sämtliche Werke (SW), nach der ersten ausgabe von Julius Frauenstadt, besorgten Gesamtausgabe neu bearbeitet und herausgegeber von Ahturflücher von Hürstüchüber Hürstüchüber Hürstüchürger Hürstüchürger Hürstüchürger Hürstücher Häger Hüberchüber Hürstücher von Hürstücher von Hürstücher von Hürstücher von Hürstücher von Hürstücher von Hürstücher von Hürstücher von Hürstüchlöschen Auflage von Angel dübscher Brockhaus, Mannheim, 1988, 27. §, pp. 165-182. Ez a gondolat, amelyet a fejezetek fejeznek ki és vitatnak a világra, mint akaratra, világos példát talál folyamatára, amelyet esztétikailag nagyvonalúan írnak le, mint szinte minden, ami Schopenhauer tollából származott. 7
a világot átalakító és önmagunkat átalakító autonóm törvényeken keresztül szabályozhatjuk kifejezési módjaikat. A könyv, amely a kezedben van, az MVZ M en C Navarro Hernández Jaime Alonso állatkísérleti ajánlott eljárásainak kézikönyve; MVZ Ramírez Ojeda Roberto Aarón; Az MVZ Villagrán Vélez Carlos mindennek egyértelmű példája. A túléléshez való jogát a természeti törvények nyilvánvaló betartása során az uralomhoz hasonló cselekedetekkel foganatosíthatja, és meg kell adnia nekik az erkölcsi kötelezettségekhez csatolt iránymutatások szerint autonóm módon szabályozott formát, amely tiszteletben tartja és abból indul ki, hogy az embernek méltóságot kell adnia azon lények, amelyek ezen a téren együtt léteznek, hogy ne maradjanak továbbra is a brutális domináns állatok a bolygón, amely saját biológiai jellemzői miatt képes volt kijutni az ökoszisztéma-együttműködés minden láncából és folyamatából.
DR. LUTZ ALEXANDER KEFERSTEIN CABALLERO
ELSŐ RÉSZ BEVEZETÉS
1. ábra A tudományos kutatási folyamat koncepcionális modellje. Navarro HJA 2010
1.2. Az állatok kísérletekben való felhasználásának eredete Bár felismerték, hogy az összes biomedicina területén kidolgozott tudományos kutatás előrehaladása hatással van az élőlények jobb életminőségére, az állatokkal végzett kísérletek közepe óta nyilvános viták tárgyát képezik. 18. század. A 19. század elején az állatkísérletek a tudomány fontos módszereként jelentek meg; amelyek a kísérleti élettan és idegtudományok megjelenését jelölték, ahogyan ma ismeretesek. Az élő állatok felhasználásának első feljegyzése az Erasistrato által a korporális humorral kapcsolatos tanulmány volt, amelyet Kr. U. III. Században végeztek Alexandriában. Később Galen (Kr. U. 129-200) orvos élő sertéseket használt fel a különféle idegek működésének vizsgálatára és az ureterek helyzetének bemutatására. A reneszánszban új érdeklődés merült fel az orvosi ismeretek iránt. Andreas Vesalius (1514–1564) majmokkal, sertésekkel és kecskékkel több kísérletet végzett, amelyekből nagyon pontos anatómiai rajzokat készített, és néhányat megkérdőjelezett.
MÁSODIK RÉSZ A TERVEZÉS ELŐTT MÓDSZERTANI ÉS ETIKAI SZEMPONTOK
** INFANTE CC, 2002. Személyes kommunikáció.
2. ábra: Az elméleti összefüggések koncepcionális modellje egy kutatási projekt kidolgozásához. Navarro HJA 2005
3. ábra: A kutatási probléma kiválasztásának folyamatának koncepcionális modellje. Navarro HJA, Ramírez ORA. 2010
A kutatási kérdésnek meg kell felelnie a következő jellemzőknek: o egyedi módon kell feltenni. o Legyen egyértelmű, egyszerű és összetévesztő összetevők nélkül. o Legyen releváns és következetes. o Legyen újszerű. o Legyen életképes. o Legyen ellenőrizhető. o Legyen etikus. o Nyilatkozatának eleve meg kell határoznia
• A kutatási kérdés helyes megközelítése adja meg a hangot a kutatási probléma azonosításához. 3. A KUTATÁSI JEGYZŐKÖNYV FEJLESZTÉSE 3.1 Projekt címe A jó címnek rövidnek, pontosnak és tömörnek kell lennie. Ennek tartalmaznia kell és egyértelművé kell tennie az olvasó (áttekintő) számára mind a központi célokat, mind a vizsgálati változókat. A cím tartalmazza a kulcsszavakat a projekt osztályozásához és indexeléséhez. Ha lehetséges, hogy ne tartson sokáig, akkor előzetesen meg kell adnia a protokoll állását. Fontos meghatározni, hogy mely populációt vagy univerzumot vizsgálják. (9) 3.2 A projekt igazolása A tudományos kutatás a válaszok keresésére irányul, de lehet, hogy nem is talál, mert a kutatás iteratív folyamat, nem végleges: „Bár az ókori tudomány valaminek látszott, befejeződött, amelyek fogalma
lehetséges, vagy meggyőző érvvel kell szolgálnia annak bizonyításának szükségességéről, hogy mi ismert és mi a tény, amit új felfedezések megkérdőjeleznek. Az indoklásnak le kell írnia a várhatóan megszerzendő tudás típusát és alkalmazásának célját is. Meg kell jelölnie a kutatási eredmények terjesztésének és felhasználásának stratégiáját a keletkezett ismeretek lehetséges felhasználói alapján. Az indoklásnak a következőkre kell válaszolnia: • • • • •
Hogyan kapcsolódik a kutatás a régió és az ország prioritásaihoz? Milyen ismereteket és információkat szereznek? Mi a célja a tanulmány során nyert ismereteknek? Hogyan fogják nyilvánosságra hozni az eredményeket? Hogyan fogják felhasználni az eredményeket, és kik lesznek a kedvezményezettek?
1726 1790 1880 1888 1902 1905 1919 1923 1928 1929 1932 1933 1939 1942 1943 1945 1954 1956 1964 1968 1970 1973 1982 1984 1989 1992 1995 2000 2001
3.3 Kutatási célok. (Általános és specifikus) A kutatási céloknak egyértelműen meghatározottaknak és rugalmasaknak kell lenniük, a megfelelő döntési pontok meghatározásával. Ez utóbbi segítené a nyomozót abban, hogy eldöntse, folytatja-e egy adott nyomvonalat, vagy tesztel-e másikat. A kutatás célkitűzéseinek helyes elérése érdekében figyelembe kell venni a megfelelő állatmodell kiválasztását. A beltenyésztett, tenyésztett mutáns és transzgén törzsek vagy patkányok és egerek vonalai széles skálán állnak rendelkezésre, figyelembe véve, hogy a projekt eredménye függhet,
4. ábra: A kutatási protokoll szerkezetének koncepcionális modellje. Ramírez ORA, 2008.
Indukált (kísérleti) betegségmodellek Spontán (genetikai) betegségmodellek Transzgenikus betegségmodellek Negatív betegségmodellek Árva betegségek modelljei
Használat Néhány olyan kutatási példa, amelyben a kiütéses egerek hasznosak voltak: a rák, az elhízás, a szívbetegségek, a cukorbetegség, az ízületi gyulladás, a kábítószer-függőség, a szorongás, a depresszió, az öregedés és a Parkinson-kór különféle típusainak tanulmányozása és jellemzése. A knockout egerek szintén kiváló tudományos és biológiai modellt kínálnak, amelyben a gyógyszerek és más terápiák kifejleszthetők és tesztelhetők. Ezen modellegerek közül sok a bennük inaktivált génről kapta a nevét. Például a KO p53 egeret a p53 génről nevezik el, amely egy olyan fehérjét kódol, amely normálisan elnyomja a tumor növekedését a sejtosztódás leállításával. A gént inaktiváló mutációkkal született emberek Li-Fraumeni-szindrómában szenvednek, amely állapot drámai módon megnöveli a korai csontdaganatok, az emlőrák és a hematológiai rosszindulatú daganatok kialakulásának kockázatát. Más modelleknek fizikai jellemzőknek vagy viselkedésüknek megfelelően néha szellemes és kreatív neveket adnak. Például a "Metuzaláva" (metuzálé) egy kiütő egér, amelyet az emberi öregedés mechanizmusainak és a faj élettartamának növelésére terveztek.
Korlátozások Bár a knockout egér technológia értékes kutatási eszköz, van néhány fontos korlátozás: • A knockout gének ("knockouts") körülbelül 15% -a fejlődési szempontból végzetes, vagyis a genetikailag megváltozott embriók nem válhatnak felnőtt egerekké. • A felnőtt egerek embrionális fejlődésének határaival kapcsolatos vizsgálatok hiánya megnehezíti egy gén emberi egészséghez viszonyított funkciójának meghatározását. Bizonyos esetekben a génnek különböző funkciói lehetnek felnőtteknél és embrióknál. • Egy gén kiütése szintén nem eredményezhet észlelhető változásokat az egérben, vagy akár más tulajdonságokat is produkálhat, mint azoknál az embereknél, amelyeknél ugyanaz a gén inaktiválódik. Például a p53 gén mutációi az emberi daganatok több mint felével társulnak, és gyakran egy adott szövetcsoportban daganatokhoz vezetnek. Az egér kiütésekor azonban az állatok a szövetek különböző tartományában fejlődnek ki. • Bizonyítottan egyes genomi lokuszokat nagyon nehéz kiütni. Ennek oka lehet ismétlődő szekvenciák, generalizált DNS-metiláció vagy heterokromatin jelenléte.
Van még egyfajta genetikailag módosított organizmus, amelyben a normál gént egy megváltozott, specifikus mutációval helyettesítették; ezeket az állatokat knockin-nek hívják. Kidolgozása nagyon hasonlít a kiütéses egerekéhez, azonban a gén letiltása helyett egy másikkal helyettesítik. Bizonyos esetekben mi
genetikai, fiziológiai vagy pszichológiai szükséges a kutatás céljainak teljesítéséhez. (35,36) Az emlősök modelljeit széles körben alkalmazták, nyilvánvaló hasonlóságuk miatt mind az emberek szerkezetében, mind funkcióiban. A patkányok, az egerek, a tengerimalacok és a hörcsögök a kedveltek kis méretük, rövid élettartamuk, könnyű kezelhetőségük és magas szaporodási sebességük miatt. A gerincesek, különösen az emlősök adják a fő modelleket az emberi betegségek kóros folyamatainak vizsgálatához. Ezeknek a modelleknek a használata nagy hasznot hozott a betegségek megismerésében és ellenőrzésében, valamint a normál fiziológiai állapotok tanulmányozásában, és várhatóan ezek továbbra is fontos információkat szolgáltatnak az orvosbiológiai kutatásokhoz. Gyakorlatilag lehetetlen konkrét szabályokat megadni a legjobb állatmodell kiválasztásához, mert számos szempontot kell figyelembe venni a szelekció során; amelyek különböznek az egyes projektektől és azok célkitűzéseitől. Van azonban néhány alább említett általános szabály:
A modell és a célfaj közötti hasonlóság alkalmassága Az információ átadásának képessége A szervezet genetikai egységessége Biológiai jellemzőinek általános ismerete Költség és elérhetőség A megszerezhető eredmények általános alkalmazása A manipulációhoz való alkalmazkodás egyszerűsége A modell alkalmazásának ökológiai következményei Etikai következmények A megfelelő tartási lehetőség rendelkezésre állása Az állat mérete A szükséges állatok száma A szükséges élettartam Szex A szükséges adatok mennyisége Az adatok gyűjtéséhez szükséges eszközök rendelkezésre állása Az állatok kora Szaporodásra van szükség, ha utódokra van szükség A faj normális viselkedésének ismerete A faj főbb betegségeinek specifikus ismerete A személyzet képzett legyen a faj (ok) kezelésében és gondozásában
A modell kiválasztása után a fő kutatónak tanácsot kell kérnie a fajt ismerő állatorvostól, aki képes azonosítani és ajánlani olyan kiadványokat vagy internetes oldalakat, ahol a faj ismeretének gazdagításához szükséges információk állnak rendelkezésre, és tapasztalata alapján képes olyan információk, amelyeket egyetlen publikációban sem könnyű megszerezni. (34.37)
M = 3,8 x> BW-0,25 ahol M az anyagcsere sebessége (oxigénfogyasztás milliliter/testtömeg-gramm/óra) és BW a testtömeg grammban. Ez az egyenlet felhasználható a különböző testtömegű állatok dózisainak kiszámítására, ha ismert az állatokban vagy az emberekben lévő dózis.
Hol: W1: annak az állatnak a testtömege, grammban, akinek a dózisát ki kell számítani W2: Az ismert test dózisa grammban, dózis1: ismeretlen dózis, mg/kg, megfelel a W1 dózisnak: ismert dózis mg/kg-ban, amely megfelel a W2-nek. Az egyenlet segédeszköznek tekinthető a gyógyszer szükséges dózisának kiszámításakor az egyik állat által a másik állat ismert dózisából, azonban óvintézkedéseket kell tenni, amikor megpróbálják használatának általánosítása; a teljesítményt -0,25-ről -0,50-re kell változtatni, ha az állatok tömege kisebb, mint 100 g. Egyes fajok bizonyos érzékenységgel reagálnak bizonyos gyógyszerekkel szemben, ezért az állatok fajok közötti reakciójában jelentős eltérések tapasztalhatók a törzs (rokon vagy nem rokon), a pigmentáció, a táplálkozási állapot, a napszak, a stressz szint, a faj típusa között. ágy, környezeti hőmérséklet, környezeti páratartalom, környezeti világítás, világos/sötét ciklusok és egyéb gyógyszerek egyidejű alkalmazása, többek között. (34,39) Példák: a) Az állat és az ember közötti dózis kiszámítása (100 g-nál nagyobb súly) W1: Emberi tömeg: 74000 g. W2: Nyúl súlya: 2800 g. D2: Nyúl adag: 60 mg/kg.
b) Dózis kiszámítása két 100 g-nál nagyobb súlyú állat között W1: A kutya súlya: 18500 g. W2: Sertés súlya: 60000 g. D2: Kutya dózisa: 15 mg/kg.
c) Dózis kiszámítása két 100 g alatti W1 súlyú állat között: Patkány tömege: 80 g. W2: Egér súlya: 18 g. D2: Egéradag: 40 mg/kg.
d) A dózis kiszámítása, amikor az egyik állat súlya meghaladja a 100 g-ot, a másiké pedig kevesebb, mint 100 g W1: A patkány tömege: 200 g. W2: Egér súlya: 18g.
6.1 A fájdalom felismerése A fájdalomra adott egyéni és fajspecifikus válaszok teljesen változatosak; Mindazonáltal elengedhetetlen, hogy a laboratóriumi és/vagy kísérleti állatokban jártas állatorvos értékelje a fájdalmat szenvedő vagy potenciálisan szenvedő állatokat, a
12) A bélmozgások változásai hasmenéssel, amely a perineumban, dysuriaban és tenesmusban szárad. 13) A fájdalmat jelző egyéb paraméterek közé tartozik a pulzusszám, a légzésszám és a testhőmérséklet növekedése. 14) A vérkémia változásai, például a hiperglikémia megjelenése és/vagy a glükokortikoidok és a katekolaminok emelkedése értékelhető. (46,48,49) 6.1.1 A fájdalom jelei egyes laboratóriumi állatoknál
Csökkent aktivitás; az élelmiszer- és vízfogyasztás csökkenése, nyalás; öncsonkítás; agresszió és hangosítás; idegenkedés más állatoktól.
Lucskos; pilo-erekció; rendellenes testtartás; görnyedt; porfirinek ("vörös könnyek") csukott szemmel; kitágult pupillák; orrfolyás.
Hasonló a patkányhoz; a vibrissae fokozott mozgása.
Hasonló a patkányhoz; nincs porfirin szemkibocsátás.