ISSN 1025-5583
57. kötet, Nє 2 - 1996

nikotinamid


A nikotinamid hatása a kolera folyadékveszteségére

Fabiбn Mendoza 1, Renzo Leуn 1

Hazánkban a kolera fontos közegészségügyi problémákat okozott. Jelenleg az elvesztett mennyiség visszanyerésével és az V. cholerae eltávolításával kezelik, de nem gátolják a toxin működését. Bizonyíték van arra, hogy a nikotinamid a víz és az elektrolit szekréciójának csökkentésével hatna a toxinra.

A nikotinamid folyadékveszteség-csökkentési képességét kolerás nyulaknál értékelték; randomizált kísérleti vizsgálat segítségével.

A nikotinamidot 10 egészséges nyúlnak adtuk be, kiválasztásuk mennyiségének (g/nap) számszerűsítésével a beadás előtt és után, hogy kizárjuk az eredmények értelmezését megváltoztató hatásokat; statisztikailag szignifikáns különbséget nem találtunk (p = 0,3). 5 nap elteltével a gyógyszer eliminációjának biztosítása érdekében a nyulakat megfertőztük két 5-ös csoportra osztva; Ha hasmenés következett be, nikotinamidot, illetve placebót adtunk be, számszerűsítettük a székletet (g/nap), statisztikailag szignifikáns különbséget találtunk (p

Kulcsszavak: Nikotinamid, kolera-toxin, guanin-szabályozó fehérje-nukleutid, ciklikus AMP.

A nikotinamid hatása a kolera folyadékveszteségre

A kolera komoly népegészségügyi problémákat okozott hazánkban. Jelenleg a terápiás megközelítés mind az elveszett térfogat visszanyeréséből, mind a mikroorganizmus megszüntetéséből áll; nincs azonban olyan terápiás beavatkozás, amely gátolja a toxin működését. Bizonyítékok utalnak arra, hogy a nikotinamid hat a toxinra, csökkentve a víz- és elektrolitveszteséget.

Ebben a munkában randomizált kísérleti vizsgálat keretében elemezték a kolerával fertőzött nyulak folyadékveszteségének csökkentésére irányuló nikotinamid-képességet. Tíz, korábban egészséges nyúl kapott nikotinamidot; A széklet tömegét (g/nap) a nikotinamid beadása előtt és után értékelték, hogy kizárják azokat a mellékhatásokat, amelyek megváltoztathatják az eredményeket. A széklet tömegében (g/nap) nem volt szignifikáns különbség a nikotinamid beadása előtt és után (p = 0,3). A nyulakat 5 nappal később V. cholerae fertőzte meg (a nikotinamid eliminációjának biztosítása érdekében); azután két csoportra osztottuk (A és B), és véletlenszerűen öt csoportot osztottak mindegyik csoporthoz. A hasmenés megjelenésekor az A csoportba tartozó nyulak nikotinamidot, a B csoportba tartozó nyulak placebót kaptak. A széklet tömegét mindkét csoportban meghatároztuk, szignifikáns különbséget mutatva (p

Vizsgálatunk bizonyítja, hogy a nikotinamid csökkenti a kolera okozta folyadékveszteséget, és új terápiát nyit meg.

Kulcsszavak: Nikotinamid, Kolera toxin, G-fehérjék, ciklikus AMP.

BEVEZETÉS

A kolera az emésztőrendszer akut betegsége, amely az emberiséget ősidők óta sújtja (1,2), univerzalitása és magas halálozása miatt releváns. Így két alkalommal érkezett hazánkba, utoljára 1991-ben (1,4).

Ez a betegség bőséges vizes hasmenés kialakulásával nyilvánul meg, amely rövid idő alatt kiszáradáshoz és hipovolémiához vezet, amelyeken a klinikai kép forog, és amelyek időben történő kezelése sokkhoz és halálhoz vezethet (2,5).

A kezelési stratégiák a jelen században az elveszített mennyiség helyreállítására és fenntartására irányultak; (3,5,6), azonban mindeddig nincs hatékony módszer a betegség idejének jelentős csökkentésére, amely minden beteg esetében alkalmazható, annak ellenére, hogy antibiotikumokat, például tetraciklint (7) alkalmaznak, amelyek elpusztítják a Vibrio cholerae de a folyadékvesztésért felelős toxinjához nem (8).

A kolera toxin (TC), miután behatolt az enterocitába, a heterotrimer fehérje alfa alegységére hat (felelős az extracelluláris jelek intracelluláris válaszokká történő átalakításáért), katalizálva a citoplazmatikus ADP-ribóz kötődését az alegységhez, az ADP nevű reakciót. ribozilezés. Ez a megkötés az adenil-cikláz állandó aktivációját eredményezi, ami viszont megnöveli a cAMP szintjét, növelve a víz és az elektrolitok szekrécióját (lásd 1. séma). Tehát a T.C. aktiválja a G fehérjét, szükség van egy ADP-ribóz molekula beépítésére az alfa alegységhez (8,9,10).

Egy ideig még nem volt módja ennek a folyamatnak a blokkolására, mivel ezen a szinten nem volt képes terápiásan hatni. A nikotinamid (NCT) és származékai azonban kimutatták, hogy csökkentik a cAMP intracelluláris szintjét, ami, mint kifejtettük, elengedhetetlen a hasmenés kialakulásához (8, 11).

Ily módon úgy gondoljuk, hogy ezt a terápiás lehetőséget nem szabad elhanyagolni, ami az eddigiektől eltérően semlegesíti a toxin hatásmódját.

Így elvégeztük ezt a kísérleti kettős vak vizsgálatot, amelyben bemutattuk az NCT antitoxin hatását, csökkentve a folyadékveszteséget a V. cholerae.

ANYAG ÉS MÓDSZEREK

Ezt a vizsgálatot a San Marcosi Nemzeti Egyetem Trópusi Orvostudományi Intézetében végezték, amelynek kutatási célokra felszerelt laboratóriumai vannak, valamint egy kísérleti állatok gondozására szolgáló óvoda 1995. augusztus 21. és szeptember 23. között. 10 "új-zélandi" fajta nyulat használtunk, amelyek megfeleltek a következő kiválasztási kritériumoknak:

a) Hímek, nyilvánvaló betegségek nélkül, aktívak és látszólag jó állapotban vannak.

b) Súly: 1000 - 1200 g között.

c) Életkor: 1,5 - 2,0 hónap.

Ily módon szabványosítjuk a nemet, az életkorot és a testsúlyt, mivel a bélfelület, amelyen a CT és az NCT egyaránt hat, az említett tényezőktől függ.

  • Ezek az állatok hasonló adag szilárd táplálékot kaptak: Conejina (Industrias Purina S.A., Lima - Peru) és Alfalfa (Medicago sativa) és folyadékok ad libitum futás közben.
  • NCT-t alkalmaztunk 99,9% -os tisztasággal (Laboratorios ROCHE), amelyet 100 mg-os dózisokra osztottunk.
  • A törzs V. cholerae használt néven katalogizálták Vibrio cholerae O: 1 El-Tor biotípus, több szerotípus (Ogawa és Inaba); izolálták és standard bakteriológiai módszerekkel tenyésztették, és az Universidad Nacional Mayor de San Marcos Mikrobiológiai Osztálya biztosította.

Mivel be fogjuk mutatni az anti-toxin hatását V. cholerae, Ezt a munkát két szakaszban végezzük. Az első annak ellenőrzésére irányult, hogy az NCT nem eredményez-e változásokat az egészséges állatok ürülékének tömegében, a második pedig a fertőzött állatok folyadékveszteségének csökkenésének összehasonlító bemutatására irányult (NCT-vel kezelt kontroll nélküli kezelés).

Ezen szakaszok megkezdése előtt úgy döntöttünk, hogy "megszüntetjük" az állatok bélflóráját Enoxacin (második generációs kinolon, amely viszonylag alacsony MIC mellett széles gramm (+) és gramm (-) spektrumot fed le) adagolásával, 2-kor. egyenként 20 mg-os adag 12 órás intervallummal. Ezt azért tették, hogy lerövidítsék a V. cholerae, hogy a nyulakban a védőflóra jelenléte körülbelül 1 hét (kísérleti tanulmányunk szerint), ami megnehezíti azok gondos megfigyelését. 5 napot vártunk a megszüntetésének biztosítására.

1. szakasz: Az NCT hatása az egészséges állatok ürüléktömegére

Az NCT egyéb olyan hatásainak kizárása érdekében, amelyek zavarják az adatgyűjtést és az eredmények értelmezését, 100 mg NCT-t adtak be orálisan a 10 nyúl mindegyikének, számszerűsítve a széklet tömegét naponta a beadás előtt és után.

5 napig várták a gyógyszer eliminációját, mielőtt továbbléptek a következő szakaszba.

2. szakasz: Az NCT hatása a fertőzött állatok ürüléktömegére

Ezt a folyamatot megelőzően az egyedi anyagcsere-ketrecekben elhelyezett 10 nyulat a véletlen számok táblázatának felhasználásával 2, 5 nyúlból álló csoportra (A és B) osztották fel.

A 10 nyulat beoltottuk a fent említett törzsbe, tápoldatban tenyésztettük és 8 órán át inkubáltuk 37 ° C-on, amíg a Mac Farley-skálán a 3. számú hasonló zavarosságot nem sikerült elérni, vizuális összehasonlító módszerrel. A beadott mennyiség 1 ml volt. nyúl által V.O.

Amikor megfigyeltük a hasmenés kialakulását (kb. 16 órával az oltás után), az (A) kísérleti csoportnak 1 ml desztillált vízben orálisan feloldott NCT adagot adtunk be. A (B) kontrollcsoportnak csak 1 ml desztillált vizet adtunk be.

Az ürülék mennyiségi meghatározását az NCT és a víz beadásának pillanatától kezdve huszonnégy órán át kell végezni, A és B csoportként jelölve. Az ürülék mennyiségét meghatározó kutató nem ismert, amely megfelelt az NCT-vel kezelt csoport és melyik a placebo csoport.

Fertőzés ellenőrzése V. cholerae, végbélpálcán végeztük standard bakteriológiai módszerekkel.

Az asszociáció statisztikai szignifikanciájának elemzéséhez és az átlagok elemzéséhez a varianciaanalízis (ANOVA 1 WAY) paraméteres tesztjét alkalmaztuk, amelyhez teljesültek a véletlenszerűség, a normalitás és a varianciák homogenitásának kritériumai. A szignifikancia szintjét (alfa) statisztikailag szignifikánsnak tekintettük

Az adatbázist az MSTAT-C statisztikai programban fejlesztették ki. Az adatokat egy IBM kompatibilis 486 DX2 mikrokomputeren dolgoztuk fel. A széklet tömegének eredményeit (folyamatos változók) átlag ± szórásként, grammban adjuk meg.

1. szakasz: Az NCT hatása a nem fertőzött állatok ürüléktömegére

  • A 10 egészséges nyúl ürülékének tömegében az NCT beadása előtt kapott értékek 35,66 ± 4,09 voltak.
  • Az NCT beadása után a 10 egészséges nyúl ürülékének tömegében kapott értékek 35,15 ± 3,92 voltak.
  • Mindkét érték hasonló (beadás előtti és utáni), nem találtunk statisztikailag szignifikáns különbséget (p = 0,3).

2. szakasz: Az NCT hatása a fertőzött állatok ürüléktömegére

Azon a tényen alapulva, hogy az A és B csoport nem mutatott statisztikailag szignifikáns különbséget az ürülék súlya tekintetében a kiindulási körülmények között (A csoport = 35,66 ± 4,09, B csoport = 35,15 ± 3,92) (p = 0,3). A hasmenés bemutatása után mindkét csoportban az ürülék mennyiségi meghatározását végeztük, statisztikailag szignifikáns különbségeket találtunk az NCT-vel kezelt csoport és a kontroll között (61,02 ± 6,84 vs. 87,2 ± 3,51) (p

További megfigyelés, hogy a hasmenés időtartama nem csökkent mindkét csoportban.

A kapott eredmények azt mutatják, hogy az NCT beadása csökkenti a folyadékvesztést a kolerával fertőzött állatokban.

Az első szakaszban bebizonyosodott, hogy az NCT nem módosítja az egészséges állatok székletmennyiségét, mivel az NCT beadását megelőző és követő napokon nem találtunk statisztikailag szignifikáns különbséget (p = 0,3) a széklet között.

* Nincs szignifikáns különbség mindkét csoport között (p = 0,3)

A második szakaszban az NCT antitoxin hatását fertőzött nyulakon igazolják, statisztikailag nagyon szignifikáns különbséget találva (p

2. táblázat.- A nikotinamid és a placebo hatása a kolerával fertőzött állatok folyadékvesztésére
Csoport
Nyulak 		Széklet súlya (gr/nap) Átlag ± SD
1 két 3 4 5.
(A) NCT 91.5 82.6 89.4 85,0 87.5 87,20 ± 3,51
(B) Placebo 52.6 62.7 62.3 70.7 56.8 61,02 ± 6,84

* Nagyon jelentős (p

Mint kifejtettük, az NCT egy nem jól meghatározott szinten zavarja a CT molekuláris hatásmechanizmusát (2), de egyértelmű, hogy csökkenti a cAMP magas szintjét az érintett enterocitákban (11).

Eredményeink az NCT biokémiai hatásával magyarázhatók az alábbiak szerint:

a) Az NCT kompetitíve gátolná a Gs-alfa ADP-ribozilációját.

b) Az NCT kötődne a TC A1 alegységéhez, inaktiválva annak működését (lásd a 2. reakcióvázlatot).

Ezeket a hipotéziseket meg kell erősíteni a jövőbeni molekuláris szintű vizsgálatokkal, mivel ellentétesek néhány olyan szerző véleményével, akik úgy gondolják, hogy az NCT megfordíthatja az ADP-ribosilációs folyamatot, ami számunkra valószínűtlennek tűnik, mivel megérti a kovalens kötés kialakulását. ( visszafordíthatatlan).

Az NCT beadása ellenére azonban a kísérleti csoport hasmenést mutatott, bár kisebb mértékű (súlyban kifejezve).

Ez azzal magyarázható, hogy léteznek olyan ioncsatornák, amelyeket a cAMP nem aktiválna, ahol a toxin közvetlenül hatna. mellett V. cholerae más toxinokat termel, mint például a Zone Occludens Toxin (ZOT), amely növeli az enterociták közötti permeabilitást, valamint azok, amelyek közvetítik a prosztaglandinok és a bélmozgást fokozó neurotranszmitterek hatását (9).

Így kísérletileg bebizonyítottuk az NCT hasznosságát az új-zélandi nyulak kolera miatti folyadékveszteségében, és meggyőződésünk, hogy ennek az új terápiás szernek a mélyebb vizsgálata hozzájárul a jelenlegi kezelési rendszerhez, amely nagyon előrehaladás ezen a területen.A múlt század.

HÁLA

Őszinte köszönetünk Dr. José Chumpitaz, a Daniel A. Carriуn Trópusi Orvostudományi Intézet - UNMSM tanácsaiért.