pentozán-poliszulfát

  • Összegzés
  • Fő
  • EREDMÉNYEK
  • A kialakult érelmeszesedéses elváltozások progressziója
  • Plazma lipidek
  • Az MMP és a TIMP aktivitása aorta kivonatokban ex vivo
  • MMP aktivitás monocitákban in vitro Y ex vivo
  • TNF α- Indukált NF- κ B és MAPK aktiválás
  • VITA

Összegzés

Fő

A heparin és a heparinszerű molekulák csökkentik a sejtproliferációt, növelik az extracelluláris mátrix nettó termelését a különféle sejttípusokban, és csökkentik a mátrix metalloproteináz (MMP) szekrécióját in vitro. 1, 2, 3, 4 A makrofágokból származó habsejtek ateroszklerotikus plakkokban való felhalmozódása korrelál az α tumor nekrózis faktor (TNF α) és az MMP, 5, 6 fokozott felszabadulásával, amely befolyásolhatja az érrendszeri átalakulást és a lepedék repedését, így kiváltva az akut szövődményeket, mint az instabil angina és az akut miokardiális infarktus. 7, 8, 9, 10, 11

A pentozán-poliszulfát (PPS) egy orális heparinoid-szerű készítmény, amely lényegében nem rendelkezik antikoaguláns aktivitással, és az interstitialis cystitis kezelésére engedélyezett. Korábban azt tapasztaltuk, hogy a PPS kezelés megakadályozza a krónikus gyulladásos és szövettani elváltozások kialakulását 5/6 nephrectomizált patkányban. 13 Megállapítottuk azt is, hogy a PPS csökkenti a mesangiális sejtek szaporodását in vitro, 14 emberi vaszkuláris simaizom sejtet, amely vaszkuláris graftokból származik, 15 és simaizom sejtet, amelyek a prosztata interstitiumból származnak. Ezenkívül a PPS növeli az MMP-2 szekréciót és serkenti a szöveti metalloproteináz inhibitor (TIMP) -1 termelését és a TIMP-3 leválását a mesangiális sejtek felszínéről. 14

Ebben a tanulmányban megvizsgáltuk az orális PPS kezelés hatását a megállapított ateroszklerotikus elváltozások progressziójára Watanabe örökletes hiperlipidémiás (WHHL) nyulakban. 17 Megvizsgáljuk a PPS hatását az érelmeszesedéses elváltozásokra, amelyek a PPS hatékonyságának klinikailag releváns és legszigorúbb bizonyítékául szolgálnak.

EREDMÉNYEK

A kialakult érelmeszesedéses elváltozások progressziója

Mátrix metalloproteináz (MMP) aktivitás monocita-makrofágokban. A humán pro-monocita U937 sejteket vagy a humán perifériás vérből származó monocitákat (PBM) 10% magzati szarvasmarha-szérummal (FBS) és 10% daganat nekrózis faktor α (TNF α)/ml-vel kiegészített RPMI táptalajban stimuláltuk. pentozan-poliszulfátot (PPS) (100 μg/ml) vagy heparint (100 μg/ml), 37 ° C-on 3 órán át inkubáltuk, majd szarvasmarha-szérum-albumin (BSA) szérummentes táptalajban 0,1% -ig 16-18 órán át., az Anyagok és módszerek részben részletezett módon. ( nak nek ) Az U937 sejtek felülúszóinak reprezentatív zimográfiai elemzése. ( b ) Az MMP-2 aktivitást denzitometriával határoztuk meg stimulálatlan U937 sejt felülúszókban. Nyitott bár, nincs kezelés; töltött rúd, 100 μg/ml PPS-sel kezeljük. Az adatokat a kontroll százalékában fejezzük ki (stimulálatlan U937 sejtek). Megmutatjuk öt független kísérlet átlagát ± sem. ** P * P ** P * P ** P

A mitogén-aktivált protein-kináz (MAPK) modulálása és a κ B (NF- κ B) nukleáris faktor aktiválása RAW sejtekben. ( nak nek ) A RAW-sejteket tumor nekrózis faktorral (TNF α) (10 ng/ml) kezeltük pentozán-poliszulfát (PPS) (400 μg/ml) jelenlétében vagy hiányában, valamint foszforilált és összes JNK, IK B és p38 szintek jelenlétében vagy hiányában. Western-blotokkal határoztuk meg. Ugyanezeket a membránokat p-aktinnal vizsgáltuk a fehérje-terhelés felmérése érdekében. P-JNK, pI κ B, p-p38 relatív expressziója β-aktinhoz ( b - d, illetőleg; # P * P ¶ P 13, 24, 25 Ezért ésszerű azt a következtetést levonni, hogy a WHHL nyulakban a PPS kezelés által kiváltott ateroszklerózis progressziójának gátlását nem a vérnyomásszint csökkenése közvetíti.

A ateroszklerózis kezelésére korábban heparin és heparinszerű molekulák alkalmazását javasolták. 1 A parenterális beadási követelmény azonban korlátozza ennek az indikációnak az alkalmazását, amely korlátozás nem vonatkozik a PPS-re. Az orális PPS-t széles körben alkalmazták az interstitialis cystitis kezelésében. 12 Nagyon kevés mérgező mellékhatása van, még akkor is, ha hosszabb ideig adják. A PPS kezelés megakadályozza a glomeruláris és vaszkuláris elváltozások, valamint a gyulladás és a tubulointerstitialis fibrózis kialakulását streptozotocin által kiváltott cukorbetegségben, 27 bGH transzgénikus egérben, 27 és patkányokban ciklosporin A nephropathiában 28 vagy 5/6 nephrectomia, 13 csökkenti a gyulladásos ízületi gyulladás tüneteit, 29 és csökkenti az infarktus méretét a myocardialis ischaemia/reperfúziós sérülés kísérleti modelljén. 30

Az a pontos mechanizmus, amellyel a PPS eléri védőhatásait, korábban nem volt tisztázva. Megállapítottuk, hogy a PPS-sel kezelt WHHL nyulak ateroszklerotikus plakkjai kevesebb makrofágot tartalmaztak, mint a vízzel kezelt kontrollok. Mások azt mutatták, hogy a PPS és a heparin gátolja a komplement kaszkád aktiválódását, 31 megköti vagy kiszorítja a gyulladásos citokineket, 32 csökkenti az NF-κ B aktivációt, 33 megszünteti a szabad gyököket, 31 és csökkenti az adhéziót és az infiltrációt. 30 Ezek a mechanizmusok közvetlenül hozzájárulhatnak a makrofágok toborzásának csökkentéséhez, valamint a plakkok fejlődésének és stabilitásának javításához.

Korábbi jelentések korrelálták a monociták és makrofágok megnövekedett MMP aktivitását az akut szövődmények, például a lepedékrepedés és a trombózis kialakulásával. 5, 6, 7, 8, 9, 10, 33 Megállapítottuk, hogy a PPS gátolta az MMP-2 és MMP-9 enzimaktivitásokat kétféle humán monocitában, egy pro-monocita sejtvonalban (U937 sejtek) és a normál önkéntesek PBM-jében. . . Ennek a hipotézisnek a további megerősítéséhez tanulmányoztuk az MMP aktivitását peritoneális makrofágokban, amelyeket PPS-szel orálisan kezelt egerekből nyertünk. Ezekben az állatokban a TNFα-stimulált MMP aktivitás a PPS kezelés után szignifikánsan csökkent a kontroll állatokhoz képest, ami arra utal, hogy ez a mechanizmus jelen lehet in vivo. Mivel az in vitro kísérletekhez használt koncentrációk közel voltak az in vivo PPS orális beadása után elért plazmaszintekhez, 27 ennek a vegyületnek terápiás felhasználása lehet emberben ezekben a betegségekben. Továbbá a PPS gátló aktivitása az MMP-kben még mindig szignifikáns volt, ha a gyógyszert TNFa-val történő stimulálás után legfeljebb 3 óráig adták be. .

A gyulladásos mediátorokról, például a TNFa-ról korábban kimutatták, hogy aktív szerepet játszanak az érelmeszesedés előrehaladásában. Fontos mechanizmus, amellyel a TNFα növeli a gyulladást, a pro-gyulladásos gének makrofágokban történő szabályozása. Mivel megállapítottuk, hogy a PPS elnyomta a TNFα-stimulált I κ B foszforilációt, az NF-κ B transzkripciót és a p38 foszforilációt, lehetséges, hogy a PPS közvetlenül csökkentheti a TNF α által indukált NF-κ B és AP-1 aktivitásokat. Az a megállapítás, hogy a PPS csökkenti a TNFa-stimulált mRNS iNOS, MCP-1, ICAM-1 és CXCL-1 expresszióját a vese proximális tubuláris sejtjeiben és podocytáiban az NF-KB gátlása révén, közvetetten alátámasztja ezt az érvelést.

Ezért a PPS jótékony hatása a megállapított érelmeszesedéses elváltozásokra magában foglalhatja a kollagén mennyiségének stabilizálását a plakkokban, az MMP és a TIMP aktivitásának modulációja révén, az atherosclerotikus plakkba történő makrofág infiltráció csökkentését, valamint a monociták/makrofágok gyulladásának gátlását, amelyet a MMP aktivitás, az NF-k B aktiválása és a p38 foszforilációja.

A PPS emellett csökkenti az acetilezett kis sűrűségű lipoproteinek kötődését az endoteliális sejtekhez, 45 és szelektíven inaktiválja számos növekedési faktort, amelyek kötődnek a heparinhoz. 46 Ezenkívül a PPS negatív töltésű és hidrofil, két olyan tulajdonság, amely elősegíti annak lokalizálódását az endoteliális sejtek felszínén és a glükokalyx „pajzsának” megőrzését. 31

Összegzésként bemutatjuk, hogy a PPS kezelés orális beadása lassítja a megállapított ateroszklerózis progresszióját WHHL nyulakban. Úgy tűnt, hogy a PPS-hatás összefügg a gyulladáscsökkentő képességgel, ideértve a makrofágok beszivárgását is, valamint az MMP és a TIMP aktivitását az ateroszklerotikus aorta falán belül úgy szabályozza, hogy a kollagén lerakódását elősegítse, nem pedig kollagén lerakódását. Ezek a tulajdonságok elősegíthetik a plakk stabilitását. A PPS-sel végzett kezelés növelte az MMP-2 és a TIMP aktivitását az érelmeszesedésen, míg gátolta az MMP-2 és az MMP-9 aktivitását monocitákban/makrofágokban. További vizsgálatokra van szükség ezen megfigyelések relevanciájának felmérésére a megállapított ateroszklerózisban szenvedő betegek kezelésében.