pozitív

  • Tárgyak
  • Összegzés
  • BEVEZETÉS
  • ANYAGOK ÉS METÓDUSOK
  • Tárgyak
  • Kábítószerek
  • Sejtkultúrák in vitro és tallium áramlási tesztek
  • Felszívódás, eloszlás, metabolizmus és kiválasztás (ADME) és farmakokinetikai vizsgálatok.
  • Viselkedési eljárások
  • Diétás edzés és tartós ételválasz
  • Kokain önadagolási eljárás
  • Kihalási eljárás
  • Reset eljárás
  • ICSS eljárás
  • Viselkedési kísérleti tervek
  • 1. kísérlet: a BINA és az LY379268 hatása a kokain önadagolására és az étel által kiváltott válaszra
  • 2. kísérlet: A BINA hatása a kokain vagy az étkezést igénylő viselkedési jelek által kiváltott gyógyulásra
  • 3. kísérlet: A BINA alkalmazásának hatása az agy jutalmának működésére és a kokain által kiváltott jutalom növelésére
  • Statisztikai elemzés
  • EREDMÉNYEK
  • esszék in vitro mGluR
  • ADME és farmakokinetikai vizsgálatok In Vitro és In vivo
  • Viselkedési kísérletek
  • 1. kísérlet: A BINA és az LY379268 hatása a kokain önadagolására és táplálékkal fenntartott válaszadásra
  • 2. kísérlet: A BINA-kezelés hatása a kokain- és ételkeresési magatartás jelzéssel indukált helyreállítására
  • 3. kísérlet: A BINA alkalmazásának hatása az agy jutalomfunkciójára és a kokain által kiváltott jutalomnövelésre
  • VITA
  • Kiegészítő információk
  • Képfájlok
  • 1. kiegészítő ábra
  • 2. kiegészítő ábra
  • 3. kiegészítő ábra
  • 4. kiegészítő ábra
  • Word dokumentumok
  • Kiegészítő anyagok és módszerek

Tárgyak

  • Függőség
  • Agy
  • Farmakodinamika
  • Jutalom

Összegzés

BEVEZETÉS

A kokainfüggőség, egy krónikusan visszatérő rendellenesség, továbbra is jelentős közegészségügyi problémát jelent az Egyesült Államokban (O'Brien és McLellan, 1996; Leshner, 1997; Ohishi et al., 1998; Dackis és O'Brien, 2001), demonstrálva a a kokainfüggőség új kezeléseinek kielégítetlen igénye (O'Brien és Gardner, 2005). Számos motivációs forrás járul hozzá a kokain-visszaélés fenntartásához. Pontosabban, a visszaélések drogjainak jótékony tulajdonságai a kábítószer-használat gyakoriságának és intenzitásának fokozatos fokozódásához vezetnek, ez az egyik fő viselkedési jelenség, amely a függőség kialakulását jellemzi (American Psychiatric Association, 1994; áttekintésként lásd Koob et al. 2004; Koob, 2009). Állatkísérletekben azok a patkányok, amelyek hosszabb ideig vagy hosszabb ideig jutnak az intravénás kokain önadagolásához, napokig növelik a bevitelüket, szorosan utánozva a fokozott kényszeres drogfogyasztás emberi állapotát (Ahmed és Koob, 1998; Ahmed és mtsai, 2002).

Ezenkívül a kokain felerősíti az agyban a jutalomjeleket, ez a hatás más bántalmazási szerekkel is hasonló (Robbins et al., 1983; Taylor és Robbins, 1986; Phillips és Fibiger, 1990; Rice és Cragg, 2004). Ezenkívül a kokain jutalomnövelő tevékenységei részben megmagyarázhatják annak belső jutalmazó tulajdonságait, és tükrözhetik, hogy a pszichostimuláns szerek, beleértve a kokaint is, hogyan növelik az érzékenységet a drogot nem jutalmazó környezeti ingerek iránt (Harrison és mtsai. Markou, 2006; Kenny, 2007). Konkrétan az intrakraniális önstimulációs eljárásban (ICSS) a kokain beadása csökkenti a jutalomküszöböket patkányokban (Esposito et al., 1978; Frank és mtsai., 1988; Kokkinidis és McCarter, 1990; Markou és Koob, 1992; Kenny és mtsai.) al., 2003, 2006), tükrözve a stimuláció jótékony hatásának kokain által kiváltott fokozását.

Végül a visszaesés krónikus kiszolgáltatottsága hozzájárul a kokain-visszaélések fenntartásához (Weiss, 2005; Epstein et al, 2006). A korábban a drogfogyasztással társított környezeti ingerek bemutatása felkavarhatja a kábítószer utáni vágyat és visszaeshet a droghasználatban az emberekben (O'Brien és McLellan, 1996; O'Brien és mtsai, 1998; Dackis és O'Brien, 2001), és kokaint okozhat . magatartás keresése, ami a kokain önadagolásának helyreállításához vezet az állatokban (pl. Markou és mtsai, 1993; Katz és Higgins, 2003; Epstein és mtsai, 2006). A legfrissebb eredmények azt sugallják, hogy a gyógyszer önadagolásának alapjául szolgáló idegi mechanizmusok különböznek azoktól, amelyek a megvonás alatti relapszus kiszolgáltatottságát közvetítik (Shalev és mtsai, 2002; Kalivas és Volkow, 2005; Shiffman és mtsai, 2006). Ezért az új vegyületek feltételezett terápiás hatásainak értékelése során fontos megvizsgálni a vegyületeknek a kokainfüggőség különböző aspektusaira gyakorolt ​​hatásait.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Tárgyak

A kísérlet kezdetén 300-350 g tömegű hím Wistar patkányokat (Charles River, Raleigh, Észak-Karolina) ketrecenként kettőt helyeztünk el hőmérsékleten és páratartalommal szabályozott óvodában fordított fény-sötét ciklusban, 12 órán át. (a fény 2000 óránál világít). Valamennyi teljesítménytesztre a világos-sötét ciklus sötét szakaszában került sor. A patkányok korlátlan hozzáférést kaptak a vízhez és az élelemhez, kivéve az étkezési edzés során, amikor az ételt patkányonként napi 20 g-ra korlátozták. Valamennyi állatot az Országos Egészségügyi Intézet irányelveinek megfelelően kezeltük az állatok gondozásának alapelveiről. Az állattartó létesítmények és a kísérleti protokollok összhangban voltak a laboratóriumi állatgondozás értékelését és akkreditálását végző egyesülettel.

Kábítószerek

In vitro sejttenyészetek és tallium fluxus vizsgálatok

Humán embrionális vese (HEK-293) sejtvonalakat, amelyek együtt expresszálják a patkány mGluR2 vagy patkány mGluR3 és G fehérjéhez kapcsolt belső rektifikáló káliumcsatornákat (GIRK) (Niswender és mtsai, 2008), alkalmaztuk a vegyület aktivitásának in vitro értékelését. tallium fluxus vizsgálatokkal. . A sejttenyésztési körülményekre, a patkány mGluR2 vagy mGluR3 GIRK sejtvonal előállítására vonatkozó teljes kísérleti eljárásokat és a tallium áramlási vizsgálati protokollokat a Kiegészítő anyagok és módszerek tartalmazzák.

Felszívódás, eloszlás, metabolizmus és kiválasztás (ADME) és farmakokinetikai vizsgálatok.

A kísérleti eljárások teljes leírását, a BINA abszorpciójának, metabolizmusának és kiválasztásának értékelését, valamint a farmakokinetikai vizsgálatokat a Kiegészítő anyagok és módszerek tartalmazzák.

Viselkedési eljárások

Élelmiszer-képzés és tartós élelmiszer-reagálás

A patkányokat táplálékkorlátozás alá helyezték (patkányonként 20 g/nap), és 45 élelmezési pellet után kutatva képezték őket (Research Diets, New Brunswick, NJ). A képzés egy fix time boost ütemezéssel indult, 1 timeout 1s (FR1 at 1s), amelyet aztán 20s korban FR1-re emeltek. Az aktív kart csak az étkezési edzés során használták. Az étrendi válasz sikeres megszerzését úgy határoztuk meg, hogy 100 pelletet nyertünk egy 60 perces munkamenet során. A képzési időszak körülbelül 5 napig tartott. Ugyanazon kiképzési eljárást alkalmazták mind az étkezésre reagálók, mind a patkányok számára, akiknek ezután engedélyezték a kokain önadagolását.

Kokain önadagolási eljárás

Teljes méretű kép

  • Töltse le a PowerPoint diát

ADME és farmakokinetikai vizsgálatok in vitro és in vivo

Teljes méretű asztal

Teljes méretű asztal

Teljes méretű asztal

Viselkedési kísérletek

Az ANOVA-analízisek egyetlen kísérlet esetében sem tárták fel az adagolási sorrendnek a kokain önadagolására, visszaállítására vagy az ICSS-adatokra (küszöb és késleltetés) gyakorolt ​​hatását (az adatokat nem mutatják be).

1. kísérlet: a BINA és az LY379268 hatása a kokain önadagolására és az élelmiszer-fenntartott válaszadásra

A kokaininfúziók számát a kokain önadagolásának megszerzése során ShA és LgA patkányokban, valamint a kokain önadagolásának fokozódását LgA patkányokban a 2. ábra mutatja. Mind az ShA, mind az LgA patkányok stabil kokain önadagolást kaptak (azaz a kokain száma) szerzett infúziók) az 1 órás önigazgatás első 10 napján. Az ezt követő vizsgálati szakaszban az ShA patkányok továbbra is stabil kokainbevitelt mutattak (azaz a megszerzett kokaininfúziók számát) 1 órás tesztfolyamaik során (F 19, 209 = 1,3, ns), míg az LgA patkányok fokozatosan növelték kokainbevitelüket az „eszkalációs fázis” (azaz amikor napi 6 órán át kokainhoz jutottak) 94,25 ± 8,64 infúzióról az „eszkalációs fázis” első napján 128,75 ± 3,99 infúzióra az „eszkalációs fázis” 20. napján (F 19, 285 = 6,18, p

A kokain önadagolásának megszerzése rövid (ShA, 1 órás munkamenet) és hosszú (LgA, 6 órás munkamenet) hozzáférési feltételek mellett. A grafikon mutatja az ShA és LgA csoport által elért infúziók számát (átlag ± SEM) a kokain önadagolásának megszerzésének kezdeti 10 napjában és az azt követő 20 napban, amikor az LgA patkányok napi 6 órán át hozzáférhettek kokainhoz, míg Az ShA patkányok napi 1 órán át továbbra is hozzáférhettek. A megszerzett kokain-infúziók számát a ShA patkányok 1 órás munkamenetén, a 30 napos teszten és az LgA patkányok teljes 6 órás munkameneténél mutatjuk be a 20. naptól kezdve, valamint a 6–1. h ülés LgA patkányoknak. *** o

Az mGluR2 PAM BINA és az LG379268 mGluR2/3 agonista hatása patkányok kokain- és táplálékkal fenntartott válaszára. A BINA szignifikánsan csökkentette a kokain önadagolását mind ShA, mind LgA patkányokban (a, b), de nem táplálékkal fenntartott válasz (a). Az LY379268 csökkentette a kokain önadagolását mind ShA, mind LgA patkányokban (c, d) és csökkentette az élelmezéssel fenntartott válaszreakciót (c). Az adatokat az alapválaszra adott válasz százalékában fejezzük ki (átlag ± SEM; az alapértékeket lásd a szövegben). * p ** p # p ## p

A BINA hatása a kokain- és ételkereső magatartás jelzéssel indukált helyreállítására. (a) ShA patkányok, LgA patkányok és táplálékra reagáló patkányok karnyomásainak száma napi 1 órás kihalási munkamenetek során. (b) A BINA nem volt hatással az élelmezésre korlátozott patkányokban. A BINA blokkolta a kokain-keresési magatartást LgA (c) és ShA (d) patkányokban a jelzéssel indukált helyreállítási ülések során. Az adatokat a karnyomások átlagszámaként ± SEM fejezzük ki azoknál az LgA és ShA patkányok részhalmazainál, amelyek kimutatták és nem mutatták a helyreállítást (azaz a visszaállított és nem visszaállított patkányok, a medián felosztás elemzése alapján; a részleteket lásd a szövegben) . * p ** p # p @ p

Fontos, hogy eredményeink azt mutatták, hogy a BINA kifejezetten csökkentette a dákó által kiváltott kokainkeresési magatartást, anélkül, hogy befolyásolta volna a daganatok által kiváltott ételkeresési magatartást. Ezzel szemben az LY379268 csökkentette a jelzés okozta élelmiszer-pellet- (Peters és Kalivas, 2006), sűrített tej- (Baptista és mtsai, 2004) és szacharóz- (Bossert és mtsai, 2006b) keresési magatartást, a mozgáskorlátozás károsodása nélkül (Cartmell és mtsai., 1999, 2000; Bossert és mtsai, 2006b). Ezek a megállapítások azt mutatják, hogy az éhség szintjétől függetlenül az mGluR2/3 agonista beadása csökkentette a természetes megerősítő motivációját mind a szabadon táplált (Baptista et al, 2004), mind az élelemben korlátozott (Peters és Kalivas, 2006; Bossert és mtsai, 2006b ) patkányok, míg az mGluR2 pozitív modulátor, a BINA specifikusan csökkentette a cue által indukált kokain-, de nem táplálék-keresési magatartást, ami a BINA javult viselkedési profiljára utal, összehasonlítva az mGluR2/3 agonistákkal.

Összefoglalva, a jelen eredmények azt sugallják, hogy az mGluR2 specifikus szerepet játszik a kokainnal kapcsolatos viselkedésben, például a kokain önadagolásában és a kokainkeresés visszajuttatásában, a természetes táplálék-erősítő által motivált viselkedés befolyásolása nélkül. Ezenkívül az mGluR2 PAM blokkolhatja/ellensúlyozhatja a visszaélések kábítószerének jutalomnövelő hatásait, és így eltávolíthatja a kábítószerek, például a kokain fogyasztásának további motivációját. A BINA hatása a kokainra reagálásra és a kokainkeresésre, de nem az élelmiszer-reagálásra vagy az ételkeresésre, azt sugallja, hogy az mGluR2 PAM-ok ígéretes új megközelítést jelentenek a kokainfüggőség különböző aspektusainak kezelésében, és további feltárást indokolnak mind a preklinikai, mind a klinikai domainek.