Anyagok és metódusok

ceratitis

Növényi anyag. Minták vétele a Zizyphus jujuba (1. kép) Közvetlenül a Valenciában (Spanyolország) található fákból készül.

Vonzási teszt. A vonzerőteszteket rovarokban nevelkedett legyekkel végzik. Az alkalmazott környezeti feltételek állandóak; a fényperiódus 16: 8 (világos: sötét), 26 ± 1ºC hőmérséklet és 60 ± 10% relatív páratartalom mellett. A felnőttek C. capitata Élesztő-autolizátum (Sigma, Madrid) és szacharóz keverékével táplálkoznak 1: 4 arányban (tömeg/tömeg). Míg a lárvák búzakorpa, sörélesztő, szacharóz, nipagin, nipazol, víz és sósav (20: 5: 1: 0,5: 0,5: 0,5: 10: 0,1) keverékével táplálkoznak.

Gyarmata C. capitata 30 * 30 * 20 cm-es metakrilát-ketrecekben tartják. (2. fénykép), ahol a legyek felnőtt fázisukban maradnak. A nőstények a tojásokat a ketrec egyik oldalán elhelyezett hálón keresztül rakják le. A petesejtek egy vízzel ellátott tálcába esnek, ahonnan pipettával gyűjtik össze

Pasteur és mesterséges étrendre vetik, ahol kikelnek és fejlődnek. Amikor a lárvák fejlődése hamarosan véget ér, és a kátyúk befejeződnek, a lárvák tápláléktálcáját egy talajjal ellátott tálcába helyezik, hogy a lárvák kiugorjanak és eltemethessék magukat, hogy kialakuljon a báb. Ezeket a bábokat gyűjtik össze, hogy egy új ketrecbe tegyék, ahol az új generációt alkotó felnőttek ismét előkerülnek.

A ketrecek 30x30x30cm fémek (2. kép), 1 mm-es fém hálós falakkal, fém talppal és metakrilát fedéllel a tisztításhoz való hozzáférés megkönnyítése érdekében. Az egyik oldalán van egy szövethüvelyes nyílás, amely lehetővé teszi a legyek kezelését.

A vizsgálatokat 2 napos és 5 napos legyekkel végzik. A fiatal legyek (2 napos legyek) és a felnőtt legyek (5 napos legyek) vonzerejének ellenőrzésére az ételt az 1., illetve a 4. napon eltávolítják a ketrecből.

Minden teszt 3 ismétlését és vízzel végzett ellenőrzést hajtunk végre. Ehhez minden egyes ketrecbe 30 hímet és 30 nőstényt visznek be; összesen 4 ketrecet használunk minden nap, amikor egy vonzerőtesztet végeznek.

A legyek 1 órán át maradnak a vizsgálati területen, hogy alkalmazkodjanak az új környezeti feltételekhez, és elkerüljék a rovarok befogása és a vizsgálati területre történő átvitel okozta stresszt.

Ezután mindegyik ketrecbe petri-csészét helyeznek; Az 1. ketrecben egy vízbe áztatott fogpaplan vagy pamut kanóc kerül, amely kontrollként szolgál a vizsgálatokhoz, összehasonlítva a gyümölcs és a páratlan aromájú, de nedves vonzerőt. A 2., 3. és 4. ketrec minden tányéron egy darab érett gyümölcsöt tartalmaz.

Amint a legyek érintkezésbe kerülnek a gyümölccsel, fél órán át hagyják megszokni a gyümölcs illékony összetevőit, és ettől kezdve minden ketrecet 10 percenként megszámolnak, a hímeket és nőstényeket feljegyzik. kerülnek a gyümölcs tetejére, valamint az elhullott legyek száma is.

Levegőztetési teszt

illó

Az illékony anyagok kinyerése érdekében a gyümölcsöt egy nyitott üveghengerbe helyezzük, amelynek egyik vége egy nulla levegőgenerátorhoz van csatlakoztatva, a másik végén pedig egy 8 cm x 0,6 cm hosszú termikus deszorpciós csőhöz csatlakozik. 200 mg Tenax TA-val mint abszorbens.

Levegőztetés előtt egy mintát adunk át "nulla levegő" a hengeren keresztül 1 liter/perc áramlással 5 percig levegőztetni a palackot, és hogy ne tartalmazzon korábbi elemzett mintákat; a térfogat 5 L lesz.

Amint a gyümölcs bejut a hengerbe, az áramlást 3 percig 1 L/min értéken tartjuk. Ezután a mintacső a henger végére kerül, és az áramlást 0,1 l/perc-re csökkentik. A mintavételi időt 30 percig tartják.

Ezt a folyamatot egyszerre négyszer megismételjük, négyet az egész gyümölccsel és további négyet a törött gyümölccsel.

Illékony vegyületek elemzése

A Tenax csöveken adszorbeált vegyületeket termikus deszorpcióval, gázkromatográfiával és tömegspektrometriával (TD/GC/MS) elemeztük.

A termikus deszorpciót a következő körülmények között hajtották végre:

- A minta elsődleges deszorpciója: A mintát 10 percig 300 ° C hőmérsékletnek tettük alá, miközben a csövön keresztül áthaladt ez idő alatt a hélium áramlása 100 ml/perc volt. A bemeneti osztás 1,5 ml/perc volt, és igyekezett a lehető legkisebb lenni

a mintavesztés elkerülése érdekében.

- A csőből vett minta kerül megrendezésre a "hideg csapda" Tenax TA ® -val töltött kvarc, amely az elsődleges deszorpció során körülbelül 30 ° C hőmérsékleten marad.

- Miután az elsődleges deszorpció befejeződött, másodlagos deszorpció kezdődik. A másodlagos deszorpció a "hideg csapda", amelyet erős hőkezelésnek vetnek alá, így néhány másodperc alatt a hőmérséklet 30 ° C-ról 300 ° C-ra emelkedik, 21 ml/perc hélium áramlással (a másodlagos deszorpció áramlását a kimenet megosztása és az előre beállított oszlop áramlása határozza meg. 20, illetve 1 ml/perc sebességgel). A kimeneti felosztás előre beállított értéke 20 ml/perc, mert

Az előzetes vizsgálatok során bebizonyosodott, hogy ez a minimális áramlási sebesség szükséges az ilyen típusú anyagok kivonásához a csapdából. Amint a másodlagos deszorpció befejeződött, a mintát az átvivővezetéken keresztül automatikusan bekerüljük a gázkromatográfba, amely 250 ° C hőmérsékleten marad.

A kromatográf körülményei a következők: Oszlop (ZB 5, 30 m x 0,25 μ m) és hőmérsékleti program: 40ºC/3 perc/3ºC min-1/60ºC/0 perc/6ºC min-1/160ºC/0 perc/12ºC min-1/260ºC/5 perc).

A tömegdetektor egy elektronikus ütésérzékelő, amely úgy van beprogramozva, hogy 35 és 300 AMU közötti teljes szkennelést végezzen a kromatogram elkészítésének ideje alatt, amely ebben az esetben 40 perc, így az összes olyan anyagot feldolgozza, amely a detektorba kerül. Abban az időben.

Az eredmények statisztikai kezelése

A vizsgálatot normalizált értékekkel és logaritmikus értékekkel végeztük. Ez azért van, mert a vonzerő adatok általában nem oszlanak meg; Az adatok normális valószínűségi papíron történő eloszlását figyelve látható, hogy az adatok eloszlása ​​logaritmikus, amellyel az X = lg (x + 1) transzformációt alkalmazzuk, ahol X a vonzerő változó. X esetén normális eloszlás érhető el, majd ANOVA alkalmazható. Az ANOVA megadja nekünk a statisztikákat, a No ANOVA pedig az átlagot és a standard hibát.

Eredmények és vita

Vonzási tesztek

A vonzerőtesztek eredményeit statisztikailag tanulmányozták normalizált értékek és logaritmikus értékek alkalmazásával, mivel a vonzerő adatok nem normálisan oszlanak el, hanem logaritmikus eloszlást követnek. Megfigyelhető (1. ábra), hogy mind fiatal, mind felnőtt nőknél a vonzerő nagyon jelentős, nagyon magas. Érett nőstények esetén (Df = 1/82, F = 49.92, P = 0.0000) a két attraktáns vonzási szintje valamivel magasabb, mint a fiatal nőknél (Df = 1/82, F = 30.16, P = 0.0000), de a vonzerő különbség a kettő között megegyezik a két tanulmányban. Az ötnapos férfiak (Df = 1/82, F = 11,59, P = 0,0010) vonzerejének különbsége nagyobb, mint a kétnapos férfiaké (Df = 1/82, F = 5,88, P = 0,0175), de egyik esetben sincs olyan vonzerő, amellyel azt lehetne mondani, hogy a jujube vegyületek jelentősek a hímek számára (2. ábra).

A teljes vonzott legyek vizsgálatában (3. ábra) azt látjuk, hogy az életkor függvényében különbségek vannak a vonzásban. Idősebb legyek (Df = 1/82, F = 76.27, P = 0.0000) esetében valamivel nagyobb a különbség, mint a fiatal legyeknél (Df = 1/82, F = 25.74, P = 0.0000).

Így a gyümölcs (jujube) vonzereje nagyobb az idősebb legyeknél, ráadásul sokkal nagyobb a nőknél, mint a hímeknél (1. táblázat).

Ha összehasonlítjuk a vonzerő értékeit a legyek életkorával, akkor megfigyelhető, hogy az érett legyeknél nagyobb a vonzódás, mint a fiatal legyeknél. Az ötnapos legyek ugyanis ivarérettek és jobban vonzódnak a gyümölcsvegyületekhez, mint azok a legyek, amelyek még nem érték el az ivarérettséget (4. ábra). Nemtől függően nagy különbség van a nők és a férfiak vonzereje között, a nők vonzódnak a legjobban. A hímek azonban nem mutatnak jelentős vonzerőt (2. táblázat).

Illékony vegyületek azonosítása

zsidótövisbogyó

Az illékony vegyületeket úgy kapjuk meg, hogy egész vagy hasított gyümölcsdarabokat üvegcsövekbe vezetünk, amelyek egyik oldalon az áramlásmérőkhöz, a másikon pedig Tenax TA-val töltött csövekhez vannak rögzítve, ahol az illékony anyagokat összegyűjtik és a deszorpcióban haladnak. gázkromatográf. Az azonosítás a termékek tömegspektrumának a virtuális NIST MASS Spectral Database könyvtárral való összehasonlításával és a szabványokkal történő ellenőrzéssel történik. 14 vegyületet azonosítottak (3. táblázat).

A vizsgált gyümölcsökben, hasítva és egészben, elismert vonzerőjű vegyületek jelenlétét találtuk Ceratitis capitata (H ERNÁNDEZ -S ÁNCHEZ, G et al. 2001).

A jujube vonzereje többek között a gyümölcsök által kibocsátott illékony vegyületeknek, valamint annak a koncentrációnak köszönhető, amelyben ezek az illékony anyagok találhatók. Bár igaz, hogy 14 vegyületet azonosítottak, figyelembe kell venni más olyan személyek létét, amelyeket ebben a munkában nem azonosítottak, és amelyek szintén vonzó aktivitással bírhatnak. Vannak más tényezők is, mint például a gyümölcs színe, a hőmérséklet és a relatív páratartalom, amelyeknek a vonzódásra gyakorolt ​​hatása ismert. Ebben a tanulmányban a hőmérséklet és a páratartalom változékonysága nem volt befolyásoló tényező, mivel a vizsgálatokat az év azonos időszakában végezték, és nagyon hasonló környezeti feltételekkel.

Következtetések

Ebben a munkában igazolták, hogy a jujube ( Ziziphus jujuba ) vonzó tevékenységet mutat be a Ceratitis capitata.

A nőstények Ceratitis capitata jobban vonzódnak, mint a férfiak. A gyümölcs vonzereje nagyobb az idősebb legyeknél, vagyis amikor a gyümölcslégy érési szakaszban van, mint fiatal korában, de a vonzódás nem csak a nemtől vagy a Ceratitis capitata, hanem a környezeti tényezők, és főleg a gyümölcsökben található illékony vegyületek és érettségük, mivel ez meghatározza többek között illékony összetételüket.

Elismert vonzó aktivitású illékony vegyületek jelenlétét észlelték a jujuban, ami igazolja a légy vonzását ehhez a gyümölcshöz.

A különböző gyümölcsökben kimutatott illékony anyagok közül figyelemre méltó a 2,4-dimetil-heptán, az (E) -2-hexen-1-ol és az 1-hexanol jelenléte. Ezek a vegyületek lehetnek elsősorban felelősek a vonzerejéért. Ezeknek a vegyületeknek a megfelelő hordozókon történő formulálása lehetővé teszi a laboratóriumi vizsgálatukat és a későbbi terepi felhasználást.

A kapott eredmények arra ösztönöznek bennünket, hogy lépjünk előre ebben a kutatási irányban, tekintettel e munkák eredményeinek jövőbeni alkalmazhatóságára egy új, hatékonyabb és fenntarthatóbb kártevőirtási stratégiák kidolgozásában. Legtöbbjük előnyösen hatékonyabb attraktánsok megszerzésén alapul.