fehérjetartalmú

  • Összegzés
  • Fő
  • ANYAGOK ÉS METÓDUSOK
  • Az állatok gondozása és gondozása.
  • 1. kísérlet.
  • 2. kísérlet.
  • Az anyatejtermelés és a kölyökkutya bevitelének mérése.
  • A tej leptin koncentrációjának mérése.
  • A szérum leptin koncentrációjának mérése kölyökkutyákban.
  • A hasított test összetevői (zsír/fehérje arány).
  • Statisztikai elemzés.
  • EREDMÉNYEK
  • Az anya testtömege.
  • Tejtermelés és leptin koncentráció.
  • Kölyök szérum leptin.
  • A kiskutya testtömege és tejfogyasztása.
  • Korrelációs vizsgálatok.
  • A kiskutya testösszetétele 25 napos korban.
  • VITA
  • Szójegyzék

Összegzés

Optimálisnál alacsonyabb fejlődési környezetek programozzák az utódokat az egész életen át tartó anyagcsere-problémákra. Kiértékeltük az anyai étrend terhesség és/vagy szoptatás alatt alacsony izokalor fehérjében előforduló étrendjének a tejmennyiségre és a leptin koncentrációjára gyakorolt ​​hatását a szülés utáni 7., 14. és 21. napon. A kontroll anyák 20% kazeint (C) és korlátozott anyák (R) 10% kazeint ettek, hogy négy csoportot kapjanak: CC, RR, CR és RC (terhesség első betűje és második laktációs étrend), hogy lehetővé váljon az anya által befolyásolt hatások értékelése. diéta terhesség és szoptatás alatt. A tejleptin nem volt meghatározó a kölyökkutya szérum leptinjében. A kölyökkutya szérum leptinje nem gátolta a tejvágyat egyetlen posztnatális korban sem. A kölyök szérum leptinje nem korrelált a kölyök zsírszövetével. Végül a posztnatális leptin normális növekedését a kölyökkutya szérumában a prenatális alultápláltság késleltette. Ezek az adatok arra utalnak, hogy a magzati táplálkozás módosítja az újszülött leptin növekedésének ütemezését, és hozzájárulhat az étvágyzavarok és az anyagcserezavarok kialakulásához felnőttkorban.

Fő

Emberi (1) és kísérleti állatok (2) epidemiológiai vizsgálatok kimutatták, hogy a méhen belüli és a korai újszülöttkori élet alatti szuboptimális környezetek megzavarják a növekedést és hajlamosítják az embereket egész életen át tartó egészségügyi problémákra. Az anyai tápanyag-korlátozás terhesség és/vagy szoptatás idején gyakorolt ​​hatásait számos különböző modellben tanulmányozták. Különböző növekedési, endokrin és kardiovaszkuláris fenotípusok származnak a tápanyagok korlátozásától a különböző fejlődési ablakokban. A perinatális alultápláltság az utódokat felnőttkorban elhízásra hajlamosítja, a szabályozó mechanizmusok, köztük a leptin által közvetített központi idegsejtek kialakulásának változásai révén (3). A korai növekedési korlátozás utáni gyors növekedés helyreállítása növeli az elhízás és a szív- és érrendszeri betegségek kialakulásának kockázatát felnőttkorban (4, 5).

Kimutattuk, hogy az anyai fehérje korlátozása patkányokban vemhesség vagy laktáció alatt megváltoztatja a posztnatális növekedést, az étvágygerjesztő magatartást és a leptin koncentrációját a szülés utáni 110 napban (12). A fejlesztési programozásnak az utódokra gyakorolt ​​hatása az utódok nemétől és az alultápláltságnak való kitettség időtartamától függ. Teixeira és mtsai. kimutatták a leptin koncentrációjának változását a laktáció alatt olyan kölyökkutyáknál, akiknek anyja fehérje vagy energia korlátozásnak volt kitéve (13). Beszámolt adatainkkal (12) ellentétben az elválasztás utáni szérum leptin-koncentráció nem változott. Ez az eltérés a laktáció során megtartott alom méretének különbségeivel magyarázható ezekben a vizsgálatokban.

Kevés figyelmet fordítottak arra, hogy a különféle tápanyag-korlátozási kezelések hogyan változtatják meg a tej mennyiségét és minőségét a szoptatás alatt. Társításokat tettek közzé az utódok súlya, az utódok növekedése és a tej leptin-koncentrációja között (14). Azonban olyan altriciali fajokban, ahol a korai posztnatális leptin emelkedik, kritikus szerepe van az agyban lévő étvágygerjesztő központok érésében, fontos meghatározni, hogy az e fő érési funkcióért felelős leptin magzati vagy anyai eredetű-e.

Értékeltük az alacsony izokalor fehérje tartalmú étrend terhesség és/vagy szoptatás idején történő hatását a kölyökkutyák számára rendelkezésre álló tej mennyiségére és a tej leptin koncentrációjára a PND 7, 14 és 21 között, hogy megállapítsuk, van-e összefüggés az újszülöttek között. A szérum leptin koncentrációja a tej leptin koncentrációival és a teljes tej leptinnel a kölyökkutyák számára az újszülött élettartama alatt patkányokban.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Az állatok gondozása és gondozása.

Minden eljárást a mexikói Salvador Zubirán (Országos Orvostudományi és Táplálkozástudományi Intézet) (INCMNSZ) állatkísérleti etikai bizottsága hagyott jóvá. Részletesen publikálták az utódok négy csoportjának anyai étrendjéről, neveléséről és kezeléséről (15). Összefoglalva, a gátak szűz albínó nőstény Wistar patkányok voltak 11 ± 1 hét és 240 ± 20 g tömegűek, az INCMNSZ-től kapták. A nőstény patkányokat rendszeresen kerékpároztuk a Purina Laboratory Chow 5001 laboratóriumban és ellenőrzött megvilágítás mellett (7: 00-tól 19: 00-ig 22-23 ° C-on világít).

A nőstény patkányokat egy éjszakán át pározták a tesztelt hím tenyésztőkkel, és azt a napi spermát, amely hüvelyi kenetben volt jelen, a fogantatás napjának, 0. napnak nevezték ki. A vizsgálatban csak azokat a patkányokat tartották meg, amelyek a hím bevezetésétől számított 5 napon belül vemhesek voltak. . A vemhes patkányokat egyedi metabolikus ketrecekbe helyezték, és véletlenszerűen két csoport egyikébe osztották be, hogy vagy 20% kazeintartalmú étrendet (kontroll-C étrend) vagy izokalorikus 10% kazeintartalmú étrendet (korlátozott étrend-R) tápláljanak (16). Étel és víz ad libitum volt elérhető .

Az ételt lapos keksz formájában biztosították, amelyeket egy rács mögött tartottak, amelyen keresztül a patkányok rágcsálták az ételt. A fogamzás utáni 20. napon a vemhes patkányokat normális ketrecekbe helyeztük a szülés optimális körülményei között, ami a nap kora órájában, 9 óra között történt. és a koncepció után 22-én délben. A szülés napját a posztnatális élet 0. napjának tekintették.

Az anya súlyát, az alom méretét és az utódok súlyát feljegyeztük születéskor. Az anogenitális távolságot féknyergekkel mértük. Közzétett adataink szerint (12) a nemet annak alapján ítélték meg, hogy az anogenitális távolság kisebb volt-e (nő) vagy nagyobb, mint (férfi) 2,5 mm. A vizsgálati alanyok homogenitásának biztosítása érdekében 14-nél több vagy 12-nél kevesebb kölyökkutya almát vették fel. A 12-14 kölyök almokat minden anyánál 12 kölyökhöz igazították, a nemek arányát a lehető legközelebb tartva az 1: 1-hez. Négy csoportot hoztak létre: CC, amelyben a terhesség alatt a kontroll étrendet kapó anyákat továbbra is etették a kontroll étrend laktáció alatt; RR, amelyben azok az anyák, akik terhesség alatt korlátozott étrendet kaptak, laktáció alatt továbbra is korlátozott étrendet kaptak; CR, amelyben a terhesség alatt a kontroll étrendet kapó anyák a korlátozott étrendet kapták a szoptatás alatt; és CR, amelyben a terhesség alatt korlátozott étrendben részesülő anyák a kontroll étrendet kapták a laktáció alatt. Az elválasztás után (PND 21) az összes kölyökkutyát C diétával etették.

1. kísérlet.

Huszonkét anya/alom: CC (n = 5: 5,6 ± 0,4 hím/alom, 6,4 ± 0,4 nő/alom), RR (n = 6: 5,5 ± 0,5 hím/alom, 6,5 ± 0,5 nőstény/alom), CR (n = 6: 5,3 ± 0,7 hím/alom, 6,7 ± 0,7 nő/alom) és CR-t (n = 5: 6,2 ± 0,2 hím/alom, 5,8 ± 0,2 nő/alom) vizsgáltak anyatej és kölyök termelésére tejfogyasztás. Véletlenszerűen alomonként két hím és két nőstény kölyköt alkalmaztak a tetem összetevőinek meghatározására. A kiskutya neme szerinti különbségek előzetes elemzése nem mutatott különbséget, ezért az összes adatot összesítettük.

2. kísérlet.

Nyolcvan anyát és almot, n = 5 korcsoport szerint, az anyai és a kölyökkutya szérum leptin koncentrációinak vizsgálatára használtuk. Véletlenszerűen két hím és két nőstény kölyköt/almot alkalmaztak koronként a szérum leptin meghatározásához, kivéve a PND 2 utódokat, amelyekben minden kölyköt használtak minden nemre almonként (n = 4-8 kölyökkutya/nem), és felmért mintákat Ebben a korban nem találtak nemi különbséget a szérum leptinben, ezért átlagoltuk a férfiak és a nők adatait.

Az anyatejtermelés és a kölyökkutya bevitelének mérése.

7: 00-kor a 7., 14. és 21. PND-nél a kölyköket 4 órán át eltávolították az anyáktól, amely során az anyák ad libitum-ban ettek, miközben a kölyköket nem etették. A kikelt fiókákat a farokon állandó jelölővel látták el. A gátakat a 4 órás periódus elején és végén lemértük. A kölyköket külön-külön lemértük, mielőtt visszatértek az anyákhoz, majd 1 órával később.

Amint az alábbiakban tárgyaltuk, az anya és a kölyök súlygyarapodás közötti kiváló korrelációt alkalmazták az anya súlygyarapodásának a tejtermeléshez való közelítésének igazolására. A relatív tejbevitelt a kölyökkutya abszolút táplálékbeviteléből/testtömegéből számítottuk.

A tej leptin koncentrációjának mérése.

A tejet PND 7, 14 és 21-nél kaptuk. A kölyköket 4 órán keresztül eltávolítottuk az anyáktól, majd az anyák 0,8 U oxitocint (ip) kaptak, és a tejet 15 perc múlva expresszálták. A mintákat vortexeljük, alikvotáljuk és -20 ° C-on lefagyasztjuk az elemzésig. A tejmintákat 37 ° C-on felolvasztották, és erőteljesen rázogatták a pipettázás előtt, hogy biztosítsák a minta egységességét. A tej leptin-koncentrációját RIA-val határoztuk meg, a Linco Research, Inc. kereskedelmi patkánykészletével, 0,5 ng/ml kimutatási határral, 100 ul mintaméretet használva. A tejmintákat két példányban elemeztük.

A szérum leptin koncentrációjának mérése kölyökkutyákban.

7 órakor a PND 7-ben 14 és 21 kölyköt 4 órán keresztül eltávolítottak az anyáktól, amely alatt a kölykök nem táplálkoztak. Az összes mintát éhomi patkányoktól kaptuk, hogy elkerüljük a leptin variációit. A 2 napos kölyköket nem éheztették. 11:00 és dél között a kölyköket rágcsáló guillotine (Thomas Scientific, NJ) segítségével lefejezéssel gyorsan elaltatták. A törzsvért polietilén csövekbe vettük, és 1 órán át 4 ° C-on hagytuk. A vérmintákat 1500 g-on 15 percig 4 ° C-on centrifugáltuk. A szérummintákat az elemzésig -20 ° C-on tartottuk. A kiskutya szérum leptin koncentrációit RIA-val határoztuk meg a Linco Research, Inc. kereskedelmi patkánykészletével. Mindegyik szérum mintát két példányban teszteltük.

A hasított test összetevői (zsír/fehérje arány).

25 napos korban a patkányokat a fent leírtak szerint gyorsan leölték, és analízisig kis műanyag zacskókban fagyasztva tartották őket. A fejet és a gyomor-bél traktust eldobták a kölyköktől, és nem vették bele az elemzésbe. Mérés (nedves tömeg) után az egyes tetemeket apró darabokra vágtuk, kátrányos főzőpohárba helyeztük és 60 ° C-on állandó tömegig szárítottuk. Az elvesztett súly víztömegnek számít. A szárított tetemeket ledarálták és alikvot részeket vettünk. A zsírt gravimetriásan határoztuk meg, az oldószert elpárologtattuk a hexán-izopropanol extraktum alikvot részéből Soxhlet-módszerrel, az összes nitrogént pedig Kjeldahl-módszerrel (17).

Statisztikai elemzés.

Az alomban lévő állatok adatait átlagoltuk, és az elemzést csak az alomszámra végeztük. Minden adatot átlagként ± az átlag standard hibájaként adunk meg. A statisztikai elemzést ANOVA-val, majd Tukey-tesztet hajtottuk végre. A párosítatlan t tesztet a férfiak és a nők adatainak összehasonlítására is alkalmazták. Az anyatejtermelést, a kölyöktej-bevitelt, a kölyök és az anya szérum leptinjét, valamint a kölyök testtömeg-összefüggéseit Pearson-korreláció segítségével számoltuk. o

Kölyök szérum leptin. Átlag ± SEM, n = 5 elválasztott anya alma. * A maximális leptinérték ugyanabban a csoportban, p 0,05), vagy amikor az összes csoportot és a különböző napokat csoportosítottuk (r = 0,04, p = 0,7). A leptin aránya a szérumban a leptintől a kölyök tejéig minden életkorban magasabb volt a CR-ben, mint a CC-ben (p

A kölyökkutya tejfogyasztása a tejtermelés függvényében (A) PND 7 (r = 0,14, p = 0,6), (B) 14 (r = 0,8, p

A kölyökkutya szérum leptinje a tejbevitel függvényében (A) CC (r = 0,3, p = 0,3), (B) RR (r = 0,003, p = 0,9), (C) CR (r = 0,1, p = 0,7), (D) RC (r = 0,5, p = 0,07) és (E) valamennyi csoport és nap (r = 0,3, p = 0,01). Átlag ± SEM, n = 5 alom.

Teljes méretű kép

Pozitív összefüggés volt az abszolút tejbevitel (g/h) és a kiskutya testtömege (g) között a CC, CR és CR csoportokban a PND 7, 14 és 21 között (p

A kiskutya testtömege (A) az abszolút tejbevitel függvényében: CC (r = 0,76, p = 0,001), RR (r = 0,28, p = 0,3), CR (r = 0,9, p

Az utódok testösszetétele (zsír: fehérje arány) férfi (fekete sáv) és nőstény (fehér sáv) PND 25-ben. Átlag ± SEM, n = 5 alom. p PND