Posztgraduális RENDSZER A FEJLESZTÉS MŰSZAKI KAR Fokozatmunka A mester fokozat megszerzése előtt AZ ÁLLATTERMELÉS FENNTARTHATÓ RENDSZEREI, AZ IMMUNOGLOBULINOK ÉS AZ ANTBIOOTERÁPIA ALTERNATÍVJAKént: Escherichia coli: Dr. William BILROTER PRODUCTION Tutor William BILRO Pablo Cedeño Reyes Guayaquil, 2015. április 23. i

rendszer

Posztgraduális rendszerek tanúsítása Igazoljuk, hogy ezt a munkát teljes egészében Magister Pedro Pablo Cedeño Reyes végezte el, mint részfeltételt a fenntartható állattenyésztési rendszerek mesterének tudományos fokozatának megszerzéséhez. Guayaquil, 2015. április TÉZISGYŰJTEMÉNY Dr. William López Vásquez. ELLENŐRZŐK: Ing. Noelia Caicedo Coello. Dr. José Álvarez Alvarado A PROGRAM IGAZGATÓJA Ing. John E. Franco Rodríguez. ii

A FELELŐSSÉG NYILATKOZATA Pedro Pablo Cedeño Reyes NYILATKOZIK, HOGY: Az IMMUNOGLOBULINOK ÉS A CSIRKE GYÁRTÁSI RENDSZEREK BROILEREK ELLENI ANTBIOTERÁPIA ALTERNATÍVAKAK nevű diplomaprojektjét a harmadik felek kimerítő vizsgálata alapján fejlesztették ki. az egyes megfelelő oldalakon megjelenő idézetek, amelyek forrásait az irodalomjegyzék tartalmazza. Következésképpen ez a mű a sajátom. E kijelentés alapján felelős vagyok a kérdéses diplomamunka tartalmáért, valóságtartalmáért és tudományos terjedelméért. Guayaquil, 2015. április A SZERZŐ Pedro Pablo Cedeño Reyes C.I. 1308992104 iii

Posztgraduális rendszerengedély I. Én, Pedro Pablo Cedeño Reyes, engedélyezem az Universidad Católica Santiago de Guayaquil kiadványt az Intézmény könyvtárában a projekt címe: Immunglobulinok Y, az Escherichia coli elleni antibiotikus terápia alternatívájaként brojlercsirkék termelési rendszereiben, amelynek tartalma, ötletei és kritériumai az én kizárólagos felelősségem és szerzőségem. Guayaquil, 2015. április A SZERZŐ Pedro Pablo Cedeño Reyes C.I. 1308992104 iv

KÖSZÖNET a Santiago de Guayaquil Katolikus Egyetemnek. A Llaguno Cía-hoz. Ltda., Amiért lehetővé tettem számomra ezt a kutatási munkát az állattenyésztés területén és a tulajdonukban lévő tulajdonságokkal kapcsolatban. Dr. Gonzalo Llaguno Figueroának, aki mindig támogatott engem a vizsgálat során. A Q.F. Soraya Tapia Bastidas, a Laboratorios Llaguno termelési vezetője. Dr. Pedro Sacoto-nak. A Laboratorios Llaguno termelési vezetője. Ing. Marcos Holguín Burgosnak. A műszaki karbantartási osztály vezetője. Dr. Aníbal Robalino Robayo-nak. Tanár és barát. Dr. Mauro Loor Macíasnak. Tanár és barát. Professzorunknak szeretettel, tisztelettel és csodálattal. v

MUTATÓ FEJEZET TARTALOM OLDAL. 1. MEGKÖZELÍTÉS. 1 1.1. HÁTTÉR . 1 1.2. A vizsgálat tárgyának leírása. 3 1.3. Indokolás. 4 1.4. Kutatási kérdések. 6 1.5. Célok. 7 1.5.1. Tábornok. 7 1.5.2. Sajátos . 7 2. ELMÉLETI KERET. 8 2.1. Colibacillosis. 8 2.1.1. Előfordulás és eloszlás. 9 2.1.2. Etiológia és patogenezis. 10 2.1.3. Klinikai leletek és elváltozások . 14 2.1.4. Diagnózis. 15 2.1.5. Zoonosis. 17 2.1.6. Kezelés. 20 2.1.7. Megelőzés. 21 2.2. A baktériumok antimikrobiális szerekkel szembeni ellenállása 22 2.3. Az enterális fertőző problémák alternatív kezelése . 25 2.3.1. Az oregánó növény illóolaja. 25 2.3.2. Immunmodulátorok használata 26 2.3.3. Prebiotikumok és probiotikumok . 27 2.3.4. Fitogén élelmiszer-adalékanyagok (PFA). 28 2.3.5 Szerves savak 28 2.3.6. Immunglobulinok alkalmazása Y. 29 2.4. Immunglobulin Y, tojássárgájából. 30 vi

2.4.1. Az IgY specifitása. 33 2.4.2. Az IgY átvitele a tojásba 34 2.4.3. Az IgY kivonása és izolálása tojássárgájából. 35 2.4.4. Az IgY használata és előnyei . 36 2.4.5. Y-immunglobulinok alkalmazása diagnosztikai immunoszerológiai vizsgálatokban 38 2.5. Vírusok vagy baktériumok titrálása 39 2.5.1. Képesítések. 39 2.5.2. A fokozat típusai. 40 2.6. Vakcinák alkalmazása. 43 2.7. Kulturális média . 43 2.7.1. A táptalajok osztályozása. 44 2.7.1.1. A táptalaj konzisztenciája szerint 44 2.7.1.2. A táptalajok rendeltetésük szerint . 45 2.7.2. Kereskedelmi kultúra médiája. 46 2.7.2.1. Táptalaj L.B. (Luria Bertani) vagy Agar Miller. 46 2.7.2.2. Triptikus szójaleves (TSB) táptalaj. 47 2.7.2.3. MacConkey Agar Medium 48 2.7.3. A táptalaj előkészítése . 49 2.7.3.1. Az oldat elkészítése 49 2.7.3.2. Sterilizálás 50 2.7.3.3. Tányér öntés . 50 3. MÓDSZERTAN. 51 3.1. Fókusz. 51 3.2. Az Univerzum. 52 3.3. A kutatás helye . 53 3.4. Berendezések és anyagok. 54 3.4.1. Laboratóriumi anyagok 54 3.4.2. Terepi anyagok 55 3.5. A vizsgált változók. 56 vii

3.5.1. Kutatási változók vagy kategóriák 56 3.5.2. Változók mérése. 56 3.5.2.1. Morbiditás 56 3.5.2.2. Halálozás. 57 3.5.2.3. Kezelési költség 57 3.6. Módszerek . 57 Munka leírása . 57 3.6.1. Az E. coli izolálása és szekvenálása . 58 3.6.2. Az E. coli baktériumok titrálása 58 3.6.2.1. Táptalaj előkészítése 58 3.6.2.2. E. coli vetés és 18 órás inkubálás 60 3.6.2.3. Az E. coli első hígítása (1: 10 hígítás) és 18 órás inkubálás. 60 3.6.2.4. Az E. coli második hígítása (1: 100 hígítás) és inkubálás 4 órán át. 61 3.6.2.5. E. coli oltása szilárd táptalajban és egynapos csirkékben 61 3.6.2.6. Megfigyelési időszak. 61 3.6.2.7. Az immunglobulinok szembesítése már titrált baktériumokkal. 62 3.6.2.8. Adatgyűjtési eljárások. 63 3.6.3. Statisztikai tanulmányok 65 3.6.4. Munkaterv. 66 4. EREDMÉNYEK ÉS MEGBESZÉLÉS. 67 5. KÖVETKEZTETÉSEK. 76 6. AJÁNLÁSOK . 77 BIBLIOGRÁFIA. 78 MELLÉKLETEK 89 viii

A TÁBLÁZATOK TARTALMA TARTALOM OLDAL. 1. táblázat Az immunglobulin Y hatékonysága az 1 LD 50% E. coli-val való fertőzéssel szembeni kiváltással szemben és az élelmiszer-konverziós faktor (FC) összehasonlítása az oltást követő 7. napon. 35 napos . 68 2. táblázat A takarmány-konverziós tényező (F.C) összehasonlítása az oltás utáni 13. napon. 41 nap . 70 3. táblázat A Ross 308 csirkékre felvitt immunglobulinok biztonságossága 72 4. táblázat A kezelési költségek összehasonlítása. 73 ix

GRAFIKÁK TARTALMA TARTALOM OLDAL. 1. grafikon A kezelések hatékonysága az akkumulált FC-hez viszonyítva. 71 x

Az ábrák indexe 1. ábra 2. ábra Lomas de Sargentillo kanton helyszíne, Guayas tartomány. 89 E coli vetése folyékony tápközegben (TSB) 89 3. ábra E Coli hígítások készítése az LD50 megszerzéséhez. 90 4. ábra Az E. coli telepei MacConkey Agar-on. 90 5. ábra 6. ábra 7. ábra E. Coli beoltása egynapos csirkékbe, az LD 50 megszerzéséhez. 91 10-10 hígítással E coli-val beoltott csirkék csoportja. 91 Adatgyűjtés az E Coli-letalitás meghatározására egynapos csibéknél 92 8. ábra: Az IgY alkalmazása közvetlenül az ivóra 92 A 9. ábra az E Coli alkalmazása. 93 10. ábra Az E coli 93 xi beoltásához használt speciális fecskendő

a baromfitenyésztésben használt vegyi anyagok mennyiségének minimalizálása mellett. A baromfiiparban a termelési költségek csökkenése nagyobb lesz, ha csökkentik az antibiotikumok fogyasztását, mivel ennek a ráfordításnak a nagy importja csökkenne, növelve a nyereséget, növelve a baromfitevékenységet és javítva ugyanakkor az ecuadori baromfi infrastruktúrát. 5.

1.4. Kutatási kérdések Hasznos lehet-e az IgY-vel az E.coli baromfiiparban gyakorolt ​​hatásainak szabályozásában? Biztonságos lesz-e az IgY használata intenzív brojlercsirketermelő rendszerekben? a madarak közül? Az IgY az immunterápia alternatívája lehet 6

1.5. CÉLOK 1.5.1. Általános Az immunglobulinok alkalmazásának értékelése a brojlercsirke termelő rendszereket befolyásoló E. coli ágens szabályozásában. 1.5.2. Specifikus 1. Az immunglobulinok hatékonyságának meghatározása brojlercsirkék E. coli-provokációival szemben. 2. Elemezze az immunglobulinok biztonságosságát a brojlercsirkék intenzív termelési rendszereiben. 3. Végezze el az immunglobulin-kezelések költségeinek elemzését az antibiotikum-kezeléssel szemben. 7

virulens, amely jelentős hatással volt e nemzetek lakóinak egészségére (EFSA, 2014). 2.1.6. Kezelés Stanchi (2007) szerint azok a kezelési és környezeti feltételek, amelyeknek az érintett állatok ki vannak téve, fogékonyabbá teszik őket az E. coli iránt, a gyógyszerek válogatás nélküli használata a rezisztencia kialakulását okozta. Ezen mikroorganizmusokkal szemben antimikrobiális szerek között szerepel a szulfametoxazol + trimethopin, a gentamicin és a kloramfenikol kombinációja. Páez és Ocampo (2005) szerint E.coli kezelése: a. Kezelések az élelmiszer-furazolidonban 400 ppm 5 napig, gyógyító intézkedésként. Oxolinsav 150 ppm-en 5-7 napig. 400 ppm klórtetraciklin 5-7 napig, gyógyító intézkedésként. 400 ppm oxitetraciklin 5-7 napig, gyógyító intézkedésként. Amoxicillin 192 ppm 5 napig, gyógyító intézkedésként. Szulfadimetoxin 120 ppm + 30 ppm trimetoprin 5-7 napig, gyógyító intézkedésként. Szulfaklór-piridazin 150-300 ppm + trimetoprin 30-60 ppm 7 napig, gyógyító intézkedésként. Foszfomicin 10-40 mg/kg dózisban. Eritromicin 200 ppm + Colistin 20 ppm 5-8 napig, gyógyító intézkedésként. húsz

Pérez (2009) szerint a szerves savak bioszidikus vagy biosztatikus hatása kétféle módon történik: Beavatkoznak a szénhidrátok metabolizmusába a mikroorganizmusok sejtfalában, ahol a különféle enzimek blokkolódnak, így sejtek halnak meg. A mikroorganizmusok jobban reprodukálódnak a semlegességhez közeli pH-n, így az étel savanyításával szerves savak hozzáadásával korlátozni lehet a baktériumok növekedését. 2.3.6. Immunglobulinok használata Y Bolygónk különféle helyszínein számos kutatási munkát végeztek az immunglobulinok háziállatok egészségére gyakorolt ​​előnyeinek megerősítésére, ezeket a munkákat kísérletileg laboratóriumokban és normál körülmények között, tejtermelő istállókban végezték. formák: Egy istállóban végzett munkában két IgY-t adtak a) Tejtermék-helyettesítőnek, amelyhez egy adag porított tojássárgáját adtak, amely hiperimmunizált tyúkokból származott. b) Egész tojás közvetlen beadása, a forrás nem határozza meg, hogy varrták-e vagy nyersen. 29.

- Immunoblot. Másodlagos tesztek. - Csapadék. - Agglutináció. - Komplement-rögzítés. Harmadik tesztek. - Semlegesítési reakció. - Védelem. 2.5. Vírusok vagy baktériumok titrálása A vírusok és baktériumok titrálása, valamint a Reed és Muench módszer, idézi López (2010). A szuszpenzióban lévő vírus mennyiségének meghatározásához vírustitrálást alkalmaznak. A vírus titrálásához hígításokat végeznek a kívánt hatás elérése érdekében a legnagyobb hígítás meghatározása céljából, például: Szeretném tudni, hogy a vírus melyik hígításig öl, bénít, citopátiás hatást vált ki, többek között 2.5.1. Titrálás A titrálás lépései: Készítsen hígításokat: a leggyakrabban használt hígítás: 2. bázisú hígítás. Több kémcsőbe (számozással kell ellátni) tegyen 1 ml hígítószert (sóoldat). Később 39 kell

1 ml vírust néhány anyamintából, és adjunk hozzá az 1. számú kémcsőbe (1: 2 hígítás). Ezután 1 ml-t veszünk az első csőből, és hozzáadjuk a második kémcsőhöz (1: 4 hígítás), és így folytatjuk a hígításokat. Ezért végül minden csőben mindig lesz 1 ml térfogat, ami változni fog, az a hígítás lesz. 1 ml AAAA hígítás a 10. bázisban. Több (számozott) kémcsőbe 9 ml hígítószert (fiziológiás sóoldat) teszünk, majd néhány anyamintából 1 ml vírust veszünk, és az 1. számú kémcsőbe helyezzük (hígítás 1: 10). . Ezután 1 ml-t veszünk az első csőből, és hozzáadjuk a második kémcsőhöz (1: 100 hígítás), és így folytatjuk a hígításokat. (1/10 = 10-1; 1/100 = 10-2; 1/1000 = 10-3; 1/10000 = 10-4). 2.5.2. A titrálás típusai A szuszpenzióban lévő vírus mennyiségének meghatározásához vírusos titrálást alkalmaznak. 100% fertőző cím. Ebben a biológiai mennyiségi meghatározásban a végpontot általában a maximális hígításnak tekintik, amely ezt a hatást produkálja. 100% -os végpont megbecsülhető a maximális hígítással, amely az oltottak 100% -ában a várt hatást produkálja, ez nem túl pontos, és ritkán alkalmazzák. 40

50% fertőző cím. A legtöbb laboratórium 50% -os végpontot használ, amely a hígítás maximuma az oltottak legalább 50% -át érinti. 50% -os letális dózisban (LD50) vagy 50% -os fertőző dózisban (ID50) is kifejezik. A végpont meghatározásának legjobb módja nagyszámú állat és szoros hígítás használata. A mikroorganizmus hígításainak sorozatát készítik (vagy szérumot, ha szérumot akarnak titrálni, hogy megismerjék az antitestek szintjét), és mindegyik hígítást beoltják az alkalmazandó biológiai szubsztrát kis csoportjába (csövekben növesztett sejtek, mikrotányérok, embrió tojás, egér, többek között) általában 6–8 egység hígításonként. Reed és Muench 1938-ban, López (2005) idézi az összes laboratóriumban alkalmazott fertőző dózisok 50% -os végpontjának becslésére szolgáló módszert. Példaként a következő gyakorlatot javasoljuk: 10 bázis hígítást végeznek, általában 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10 -9, többek között. Négy vagy öt hígítást választunk beoltáshoz, hígításonként például 6 egeret használva. Feltéve, hogy az egerek a következőképpen pusztulnak el: 10-3 6 beoltott és 6 döglött 10-4 6 beoltott és 6 döglött 10-5 6 beoltott és 4 döglött 10-6 6 beoltott és 1 döglött 10-7 6 beoltott és 0 döglött 41

Az adatok hígításának halálozási sorrendje Halott életben Halott életben arány% 10-3 6/6 6 0 17 0 17/17 100 10-4 6/6 6 0 11 0 11/11 100 10-5 4/6 4 2 5 2 5/7 71 10-6 1/6 1 5 1 7 1/8 13 10-7 0/6 0 6 0 13 0/13 0 A halál összegző oszlopot úgy alakítják ki, hogy alulról felfelé adják, mivel alacsonyabb hígítások esetén nagyobb legyen a halálozás, és az élők összegzésének oszlopa felülről lefelé történik, mivel minél nagyobb a hígítás, annál nagyobb lesz az élők száma. A titer meghatározásához azt a hígítást vesszük alapul, amely a halálozási százalékot azonnal meghaladja az 50% -ot, ebben a példában 10-5 lesz. 50% lesz a hígítás és a következő között, és az 50% -ot elérő arányos arányt a következő képlet alkalmazásával számolják: (% azonnali halálozás> 50%) (50) (% azonnali halálozás> 50%) (azonnali halálozás% -a)