Összegzés

Ez a protokoll rendszeres karbantartást és gondozást ír le a zebrafish tenyésztésének optimális körülményeinek fenntartása érdekében. A videó bemutatja a zebrafish lárvák rendszerfenntartásának, elhelyezésének, etetésének, szaporodásának és nevelésének protokollját.

Absztrakt

Jegyzőkönyv

1. Karbantartási rendszer

    A zebrafish-t olyan keringési rendszerben tartják, amely folyamatosan szűri és szellőzteti a vízrendszert az egészséges vízi környezethez szükséges vízminőség fenntartása érdekében. A keringési rendszer segíti a felesleges étel- és halürülék szűrését is. A zebrafish-rendszereket különböző vállalatok kínálják, de laboratóriumunkban az USA vízi élőhely-rendszereit használjuk. A környezeti hőmérsékletet vagy a tartály hőmérsékletét általában 26 és 28,5 ° C között tartják, a megvilágítási viszonyok pedig 14: 10 óra (világos: sötét). A vízi élőhelyek zebrakos rendszere (pl. Asztali rendszer) Költségek

110 mJ/cm 2 a lámpa élettartamának kezdetén, és az adagolási sebesség idővel csökken, ami szükségessé teszi a léggömb cseréjét akkor is, ha még működőképesnek tűnik.

48 óra.
Megjegyzés: Meg kell jegyezni, hogy a dúsítatlan sós sós rák a kikelés után óránként elveszíti tápértékét. Ezért célszerű lehet 24 órán át kelni, vagy 48 óránál hosszabb ideig dúsítani, hogy a sós rákban maximális tápértéket érjünk el.

  • A kikelő rendszerből származó szennyvizet hozzáadják a karantén hulladékához, fehérítővel fertőtleníteni és később ártalmatlanítani.
  • A sós rák gyűjtéséhez távolítsa el a légcsövet, és hagyja, hogy a tenyészet 4-5 percig, de legfeljebb 10 percig ülepedjen. A kikelt sós rák a Hatcher alján gyűlik össze.
    1. Gyűjtse össze a garnélarák sóoldatát az inkubátor alján található csap segítségével. Dobja ki a kezdeti áramlást, amely kikeletlen sós sós garnélarák tojásokból áll.
    2. A meg nem született sós rák eldobása után gyűjtsük össze a kikelt sós rákot, amelyet a zebrafish táplálékául fognak használni.
    3. A sós garnélarákot a sós vízből sós sós garnélagyűjtő hálóval (

      4. Lárva nevelés

        A megtermékenyített petesejteket inkubátorban tartottuk (

      28,5 ° C) 72 órán át, amíg a lárvák kikelnek. Ők most a szabadon úszó korionlárvák, amelyek készen állnak arra, hogy átkerüljenek egy fő haltartályba. A lárvákat a megtermékenyítés után 5 nappal kell etetni (dpf), és az embriók közepén (a 3., 10. részben ismertetett összetétel) vagy a vízrendszerben kell tartani. A lárvák kerek tányérokban tarthatók

      A benne lévő víz legalább 50% -a naponta változik. A vízcserének ki kell terjednie az elhalt vagy beteg lárvák és minden más törmelék eltávolítására.

    4. Helyezze a lárvákat óvatosan egy kis méretű teret (kb. 300-400 mikron) tartalmazó tartályba. Az elhalt és beteg lárvákat el kell távolítani, és naponta néhány milliliter vizet kell hozzáadni.
    5. 14 nap elteltével a lárvatartályokat be lehet iktatni a rendszerbe, és egy kis ciklikus vízárammal (1-2 csepp másodpercenként) lehet ellátni. A lárvák növekedésével a víz áramlása növelhető. Különböző méretű terelőlemezek használhatók a lárvák méretétől függően (pl. Terelőlemez méret 300–400, 500, 700–750 és 1000 mikron), és felnőtt halakhoz normál műanyag terelőlemezt kell használni.
    6. Általában 3 hónapba telik, amíg az embriók ivarérett felnőttekké fejlődnek.

    Reprezentatív eredmények

    Számos kritikus probléma, amely egy zebrafish laboratóriumban előfordulhat, magában foglalja a házrendszer egyes/összes tartályainak vízellátásának elzáródását, a rossz vízminőséget és a szivárgást a keringési rendszer csöveiben vagy tartályaiban. Továbbá aggodalomra adhat okot a fiasítási embriók megszerzésével kapcsolatos problémák. A problémák elhárítását az alábbiakban tárgyaljuk.

    rerio

    1.ábra. Egy hím zebrafish (A) és női zebrafish (B, C) illusztrációja.


    2. ábra. Mikroszkópos nézet sós rák 12x (A), egyetlen sós garnéla 90X (B) és megtermékenyítetlen tojás 90X sós rák (C).


    3. ábra. A megtermékenyített és megtermékenyítetlen peték mikroszkópos nézete (16X), ahol csak két megtermékenyítetlen és meg nem termékenyített tojást jelölnek fekete nyilak (A). Magasabb nagyítási nézet (90X) a. megtermékenyített (B) és megtermékenyítetlen petesejt (C)


    4. ábra. Tojópozíciójú nőstény zebrafish (fekete nyíllal jelölt) ábra.

    Paraméter Optimális tartomány
    Lúgosság 50-150 mg/l CaCO 3
    pH 06.08 - 07.05 (6.0-8.5 tolerálható)
    Hőfok Olvadáspont: 26-28,5 ° C
    Keménység 50-100 mg/l CaCO 3
    Nem ionizált ammónia 3 -) két -) 6,0 mg/l
    Sótartalom 0,5-1 g/l
    Vezetőképesség 300-1 500 mS

    2. táblázat: Vízminőségi paraméterek. Vízminőségi paraméterek. A környezeti paraméterek optimális tartománya a zebrafish akváriumban 11.

    Vita

    A zebrafish az észak-indiai Ganges folyóból származik, és mind a felnőtt, mind a lárva 2 szakaszában egyre népszerűbb a kutatásban, Spence et al. 3. A zebrafish-nak számos előnye van más állatmodellekkel szemben, mint például a nagy termékenység, a könnyű karbantartás, az embriók optikai tisztítása, az embriók gyors fejlődése és az alacsony karbantartási költségek. Fogékonyak a genetikai manipulációra 6 és alkalmasak a nagy áteresztőképességű 4,5 gyógyszerek kimutatására. Termékenyítése külső, ami előnyös a fejlődésbiológusok számára. Ezen kedvező tulajdonságok miatt a zebrafish egyre népszerűbb a genetikai 7, 8 farmakológiai és viselkedési kutatásokban 9, 10. A zebrafish-létesítmény fenntartása és az embriók zebrafish-nevelése számos kihívást jelent. Itt ismertetjük tapasztalatainkat és ajánlásainkat ezeknek a kihívásoknak a kezelésére, és felvázoljuk a rendszer fenntartásának, táplálásának és a lárvák nevelésének protokollját.

    Rendszerkarbantartás

    A legtöbb zebrafish rendszer klórozott csapvizet használ, azonban egyes rendszerek ioncserélt vizet használnak. Fontos, hogy a rendszer vezetőképességét 300 és 1500 mS között tartsuk fenn

    mivel ez csökkenti azt az energiát, amelyre a halaknak szüksége van a sók testen kívül tartásához. Ezért a zebrafish nem tartható ioncserélt vízben, hacsak sókat nem adnak hozzá az optimális vezetőképesség fenntartása érdekében. A csapvíz használata esetén fennáll annak a veszélye, hogy a rendszer vízében magas rézkoncentráció alakulhat ki, mivel a szénszűrő nem távolítja el a rézt. Ezért az uSERS-nek ellenőriznie kell, hogy a réz és a rézcsövek koncentrációja a lehető legnagyobb mértékben elkerülhető-e.

    A zebrafish-t soha nem szabad túlzottan táplálni, mivel ez növelheti a víz nitrátszintjét, ami esetlegesen befolyásolhatja tenyésztésüket vagy életképességüket, mivel néhány hal meghalhat a túlevés miatt. Javasoljuk, hogy egy etetés során ne adjon több ételt, mint amennyit egy akvárium 10 perc alatt befejezhet. Nagyon fontos, hogy a zebrak halak etetése előtt távolítsuk el a sót a garnélarák sóoldatából, mivel a só túlzott koncentrációja halált okoz. Ha több zebrafish tojásra van szükség, a halakat naponta háromszor lehet etetni. A fiókák haltartályainak napi tisztítása a tojástermelés szintjét is javítja.

    A vízi élőhely-rendszerekben történő táplálkozáskor általában kikapcsoljuk a vízpumpát és a légszivattyút, hogy a halak 10 percig megegyék az ételt. Ez csökkenti a szűrőkbe mosott ételek mennyiségét. A felhasználóknak azonban ügyelniük kell arra, hogy a szivattyúkat később újra bekapcsolják.

    A zebrafish általában optimális szaporodási körülmények között van

    A lárvák növekedése

    A lárvák táplálását 5 dpf-től kell megkezdeni (a megtermékenyítés napokkal később). A fiatal lárvák száraz táplálékkal etethetők

    100 mikron nagyságú (pl. ZM100) vagy élő élelmiszerek, például paramecium és rotifers (ami serkenti a növekedést). A lassú ételméret 200 µm-rel (például ZM200) vagy 300/400 µm-rel (például ZM300) növelhető. Egy felnőtt halállománynak körülbelül 7,6 halnak kell lennie liter vízben. Ez a gyakorlat a tartályok BOD (biológiai oxigénigény) jobb fenntartásához ajánlott.

    Közzétételek

    Nincsenek összeférhetetlenségi nyilatkozatok.

    Köszönetnyilvánítás

    A szerzők köszönetet mondanak Tammy Esmailinek a laboratóriumi fogyóeszközök kezelésében nyújtott segítségéért. AA doktori ösztöndíjat kapott az Edith Cowan Egyetem Orvostudományi Egyetem Alzheimer-kórkutató és -ellátási kiválósági központjától. Az MC Doctor pénzügyi támogatást kap a perthi Rotary Klubtól. Az AM-t, a GV-t, a KT-t és az RNM-t a McCusker Alzheimer-kutató Alapítvány finanszírozza.