Andok törvény 1994; 3 (2): 125-135

plasmbtikus

A PROLACTIN HATÁSA A
PLASMATIKUS ESTOSZTERON MAGASSÁG HIPOXIÁRA VONATKOZÓ PATKÁNAKBAN

Elydia Mujica

28 napos kezelés után meghatároztuk a test és a test tömegét, valamint a plazma prolaktint (PRL) és a tesztoszteront (T).
radioimmunassay (RIA) és heremódosítás (% AT) fénymikroszkóppal.

A magasságban lévő állatoknál magasabb a szérum PRL és T szint, valamint magasabb az AT%, mint az NM-nél. Mind a kontroll, mind a kísérleti állatok testtömegének tengerszint feletti magasságának csökkenését eredményezték, a herékét azonban nem. A testtömeg, a herék és a TA% nem változott további mértékben a bromokriptin és a szulpirid beadása miatt.

Poligonális összefüggést találtak a PRL és a plazma T szintje között, megfigyelve, hogy a hipo és a hiperprolaktinémia alacsony T szinttel társul.
Összegzésképpen elmondható, hogy a tengerszint feletti magasságban fellépő akut hipoxia fokozza a tesztoszteron szekrécióját a heréknél patkányokban, ami legalább részben a prolaktin szint növekedésétől függ.

A prolaktin (PRL) az agyalapi mirigy eozinofil sejtjeiben szintetizált fehérjehormon, amelyet hipotalamusz-dopamin szabályoz, amely gátolja annak szekrécióját (1-3). A PRL szükséges a férfi és női reproduktív trakták megfelelő működéséhez (1-28). A herében a Leydig sejtekre gyakorol hatást, növelve az LH iránti érzékenységet a tesztoszteron (T) szekréciójára (29-33), és. hat a spermiumok oxigénfelvételének szintjén (34); gátló hatást írtak le a pulzáló luteinizáló hormon szekréciójára is (35, 36).

A hím hiperprolaktinémiája olyan rendellenességek sorozatát eredményezi, amelyek olyan androgénhiányra utalnak, mint a hipogonadizmus, az impotencia, a csökkent libidó, az oligozooslermia és a meddőség (2, 4, 5, 13, 1624, 26-28). Más jelentések a hipoprolaktinémia változásainak tulajdonítják a hím reproduktív funkciók változását állatokban (13, 7, 3740) és emberekben (41).

Másrészről, a magasságnak való kitettség ismert, hogy befolyásolja az agyalapi mirigy-here működését emberekben és állatokban is (42-50). Másrészt az őslakosok, csakúgy, mint akik hosszú ideig maradnak, alkalmazkodást mutatnak a magassághoz (44, 45, 51-54), amelyet megfelelő termékenység tükröz. Különböző jelentések azt mutatják, hogy akut vagy krónikus magassági kitettség esetén a hormonális válasz megváltozik (47,45-57); így krónikus hypoxiának kitett normális férfiaknál a PRI szint és az intravénás HRT-re adott maximális válasz csökken (58), míg a szakaszos magassági expozíció nem mutat különbséget a kiindulási PRI szintben, a szérumban (59).

Az állatkísérletek ellentmondásos eredményeket hoztak. A PRL-nek stimuláló (14, 60-62), gátló (13, 24, 27, 28, 63, 64) és kétfázisú hatása van a T-szekrécióra (33).

Kísérleti hipoprolaktinémiában a brómkriptin rágcsálókban történő beadása miatt bizonyos publikációk azt jelzik, hogy a T-szekréció gátlása összefügg (25, 39) vagy nem (65) a hipogonadizmussal, mások pedig fokozzák a T-szekréciót (38). A PUL-szintet növelő Sulpiride beadása viszont növeli a T-szintet (66). A herék atrófiáját más kísérleti módszerekkel elért hiperprolaktinémiában figyelték meg (13,27,28).

Ezért a patkányokban brómokriptin és szulpirid (Dogmatil, Spedrog) alkalmazásával előállított hipo- és hiperprolaktinémia hatásainak áttekintését is célul tűztük ki, amelyekről ismert, hogy gátolják (67) és stimulálják (66) a PRL szekrécióját a herékben. tengerszint (150 m) működésének vizsgálata, ezeknek a patkányoknak (4540 m) magasságba juttatott gyógyszereknek a PRL, T plazmaszintjeire és a here szövettanára gyakorolt ​​hatásainak tanulmányozása céljából.

Biologna Andina törzsből származó hím patkányokat használtunk. Mindegyikük Limában született és nőtt fel az átlagos 70 napos korig (súlya 200 és 300 gramm között), amelyben egy csoportot (ALT) 28 napra Morococha városába (4540 m) vittek. Ebben a korban a hím patkányt ivarérettnek tekintik, és a plazma tesztoszteron szintje a legmagasabb (12).

Az állatokat egy előzőleg kondicionált, szabályozható hőmérsékletű, átlagosan 22 ° C-os helyiségben tartottuk, 12 órás fény és 12 órás sötétség mellett. Ad-libitum vizet kaptak, és kiegyensúlyozott termékekkel etették őket: hizlalással (Nicovita), amennyire csak lehetséges, elkerülve a stresszt, amelyről ismert, hogy serkenti a prolaktin szekrécióját (68).

Vérzésük céljából az állatot egy kamrába helyezték, ahol étergőzökkel 2 percig érzéstelenítették, és a mintát a szem vénájának szúrásával a szem alsó szögében vették. Az étert választották érzéstelenítőnek, amely megnöveli a bazális prolaktin szintjét, mint más anasztikumok, de ezt kisebb mértékben teszi, az expozíció idejétől függően. A kiválasztott idő volt az, amelyik a legkevésbé érinti, és a legtöbb érzéstelenítőnek nem volt mellékhatása (69).

Kétféle kísérletet hajtottunk végre, mindegyiknek külön kontrollcsoportja volt:


I. kísérleti csoportÁllatok, akiknek brómokriptint (2Br-a-ergokriptint) adtak: CB-154-Sandoz, 4 mg/kg dózisban. testtömeg 0,5 ml 0,9% sz.c. sóoldatban, a kísérlet 0., 7., 21. és 28. napján, hipoprolaktinamikus patkányok előállítása céljából.

A kontrollcsoport 0,5 ml 0,9% -os s.c. sóoldatot kapott. eközben.

Ezt a CB-154 dózist választották, annak bizonyítéka miatt, hogy a többi alacsonyabb dózissal ellentétben 7 napig csökkent a prolaktin szintje (67).

Tengerszinten 70 állatot használtunk, 35-en kaptak brómkriptint és 35 0,9% -os sóoldatot. Mindegyik 35 állatból álló csoportot véletlenszerűen 5 állatból álló ketrecbe helyezték, 7 csoportot alkotva, 1-től 7-ig számozva.

Magasságban 50 állatot használtunk, 25-en kaptak brómokriptint és 25 0,9% -os sóoldatot. Minden 25 állatból álló csoportot véletlenszerűen, 5 állatból álló ketrecbe helyeztünk, amelyeknek 5 csoportja 1-től 5-ig számozott.

Az első injekció után 7, 14, 21 és 28 napon az állatokat lemérjük, vérmintát veszünk, és minden csoportból (ketrecből) véletlenszerűen feláldozunk egy-egy állatot a herék kivonása, lemérése és rögzítése érdekében Bouin oldatában, és el kell juttatni a szövettani laboratóriumba a tárgylemezek optikai mikroszkópiához való előkészítéséhez.

Mindegyik állatból hozzávetőlegesen 0,5 ml-t kaptunk. vér. Minden elemzésre szánt minta az 5 állat "vérkészletét" jelöli véletlenszerűen ugyanabba a ketrecbe és egy csoportot képvisel. Ily módon elegendő minta származik az elemzések elvégzéséhez. A mintákat centrifugáltuk, és a plazmát fagyasztva tartottuk (-20 ° C), amíg a prolaktint és a tesztoszteront radioimmunassay (RIA) módszerrel meghatároztuk.


Kísérleti csoport II: Állatok, akiknek szulpiridet (N- (1 etil-2-pirrolidil-metil) -2-metoxi-5-szulfamoil-benzamid) Dogmatil-Spedrog-ot adtak be, 1,5 mg/testtömeg-kg dózisban 0,5 ml 0,9 sóoldatban,% im hetente kétszer egy hónapon át hiperprolaktinamikus patkányok előállításához (66).

Tengerszinten 50 állatot vizsgáltak, 25 kapott Sulpiridet és 25 sóoldat 0,9% im, ketrecekben is elosztva 5 fős csoportokban. Az első injekció után 7, 14, 21 és 28 napon az állatokat hasonlóan vizsgálták leírták a Bromocriptine kísérlethez.

A hormonokat radioimmunassay-vel (RIA) mértük.


A prolaktin mérése

A reagenseket A. F. Parlow, a Nemzeti Intézet szolgáltatta
Egészségügyi (NIH/NIAMD) Patkány hipofízis hormonprogram Dr. Matilde de Bernal-nak, az Universidad del Valle (Cali-Kolumbia) szaporodási fiziológiájának laboratóriumától, amelyet ő adományozott erre a munkára.

A patkány prolaktin (NIAMD-Rat-Prolactin I-2) jelölését I-125-gyel kloramin T módszerrel hajtottuk végre. A jelölt hormont megtisztítottuk, a legmagasabb immunreaktivitású és tisztaságú 1-125 PRL-t kapva, specifikus aktivitás 100 és 200 inCi/nM között.

A plazmamintákat nyúl antiprolaktin antitest (NIAMD-anъ-patkány-Prolactin-S-4) alkalmazásával elemeztük. A szabad frakciót a megkötött frakciótól elválasztjuk egy második antitesttel, nyúl elleni juh gamma globulinnal (Antibodies Incorporated). A mintákban kapott eredményeket közvetlen összehasonlítással hasonlítottuk össze referencia prolaktinnal (NIAMDRP-1) kapott standard görbén. A kapott értékeket ng NIAMD-RPI/nulla plazma értékben fejezzük ki. Az intra- és az interay assay variációs koefficiens 3,2% és 8,2% volt, 03200 ng/ml tartományban.


Tesztoszteron mérés

Reagenseket használtak fel az Egészségügyi Világszervezet által Dr. Matilde de Bernal, az Universidad del Valle (Cali-Kolumbia) részeként, a program részeként: "A WHO egyeztetett reagens programja" és az általa erre a munkára adományozott. A plazmát (0,1 ml) éterrel extraháljuk, és az extraktumokat az anti-tesztoszteron antitesttel (OMS) reagáltatjuk. A megkötött frakciót folyékony szcintillációs számlálóval számláltuk. Az eredményeket a visszanyerés korrekciója után egy standard görbéből olvastuk le. Az intra- és inter-assay variációs együttható 4,5%, illetve 7,3% volt, 0,1-40 ng/ml tartományban.


A herék rögzítésének eljárása:

Az extrakció és a lemérés után a heréket egészben Bouin-oldatba helyeztük (becinsav: 15 ml, 40% formaldehid: 5 ml, Q. ecetsav: 1 ml). Egy órával később az oszlopokat levágták, és 2 óra múlva keresztmetszetet készítettek, így 24 órán át ebben az oldatban maradtak. Ezen idő után további 24 órán át folyamatos vízsugár-mosást végeztek; majd 6 órán át 50% -os alkoholban helyezték el őket, majd 70% -os alkoholba vitték, ahol addig maradtak, amíg a szövettani laboratóriumba küldték őket hematoxilin-eozinnal történő festésre és festésre.

A herék által képviselt változást a mezőkönkénti tubulusok számában fejezzük ki, amelyek valamilyen típusú változást mutattak, százalékban kifejezve (AT%). Objektívenként 100 tubulust értékeltünk.


Statisztikai analízis

Az eredményeket varianciaanalízissel, regresszióanalízissel és Student párosított adatok t-tesztjével elemeztük. A 0,05 vagy annál kisebb értékeket statisztikailag szignifikánsnak tekintjük.

Test és here súlya:

Felnőtt hím patkányok magasságának való kitettség csökkentette a testsúlyt az expozíció 7. napján, és herekárosodást váltott ki, amelyet a csíra hámjának leválásaként és dezorganizálódásaként, többmagvú sejtek jelenléteként és az erek megvastagodásaként, valamint Leydig normál populációjaként írnak le. sejtek; a spermatogenezis sértetlen tubulusokban marad fenn. Magasságnak való kitettség esetén a herék tömegében nem történt változás.

A bromokriptinnel vagy szulpiriddal kezelt ALT kontrollállatoktól az ML vagy az ALT szintjén kapott hormonális értékek százalékos arányát a teljes kísérlet során (7, 14, 21 és 28 nap) az átlagos ellenőrzések az ML-nél, és ezeket 100% -nak tekintik.

A tengerszinten brómkriptinnel kezelt patkányokban a testtömeg-növekedés kisebb, mint a kezeletleneknél; 28. napon a tengerszint-kontrollok kezdeti testtömegük 32% -át, a bróm-scriptinnel kezeltek pedig csak 17% -ot nyertek. A 21. napon a bromokriptinnel kezelt állatok testtömege a tengerszint felett nagyobb, mint a 14. napon (p 1. táblázat).


A bromokriptin tengerszint (SL) és magasság (ALT) hatása

7 nap elteltével a brómokriptint szubkután adták 0,4 mg/ttkg dózisban. Az ALT-nek hevesen kitett patkányokban ez nem változtatja meg a plazma PRL-szintjét, amelyet a 4 mgr/kg dózissal lehet elérni (p 2. táblázat). Patkányoknak ML-ben beadott brómokriptin (4 mg/kg) csökkenti a plazma PRL-szintjét, szignifikáns (p 3. táblázat).


A szulpirid hatása NM-n és magasságon

A patkányoknak tengerszinten beadott sulpirid fokozatosan növeli a plazma PRL szintjét (p 4. táblázat).


A plazma T szintje a plazma PRL szintje szerint

Az 5. táblázatban megfigyelhetjük, hogy a plazma T növekedése párhuzamos a PRI szint emelkedésével párhuzamosan, plazmatikusan mind a tenger szintjén, mind a tengerszint feletti magasságban, a PRI-koncentrációkig 41-60 ng/ml között. Ezen plazma PRL-szintek felett a plazma T-értékek általában csökkennek.

Annak megállapítására, hogy a plazma PRI és T szintje befolyásolja-e a plazma T szintjét, korrelációt hajtottunk végre a PRL és a T koncentráció között a tenger szintjén és a tengerszint feletti magasságon kapott adatokkal a kontroll és kezelt patkányokban, sokszögű korrelációt találva. (Y = 5 sin2x, r = 0.876, p

A PRL szükséges a herék normális működéséhez és a kiegészítő nemi szervek normális növekedéséhez. A herék szintjén a PRL növeli és fenntartja az LH receptorokat, szinergikusan hat az LH-val a tesztoszteron (T) szekréciójában. A nemi szervek szintjén közvetlenül szinergikusan hatna a T-vel, vagy növelné a T átalakulását dihidrotesztoszteronná (DHT) a célszövetben (29-33, 70, 71).

A férfiak (45,46,85) és az állatok (42-44,56, 72, 76-84) magasságnak való heveny expozíciója megváltoztatja a hím ivarmirigyek működését, a herékárosodás pedig a spermatogenezis, például az oligozoospermia és azoospermia változásával nyilvánul meg; csökkent here súlya patkányokban (49, 50, 80, 82) és megnövekedett plazma T férfiaknál (86) és állatoknál (56).

Ebben a munkában azt tanulmányozzuk, hogy a magasság milyen hatással van a plazma PRL szintjére, összefüggésbe hozva azokat a plazma T szintjével és összehasonlítva a tengerszint szintjével. A szintek megszerzése érdekében
alacsony és magas PRL esetén a brómokriptin és a sulpirid adását alkalmazzuk. A brómokriptin stimulálja a dopamin receptorokat a hipotalamusz és az agyalapi mirigy szintjén, ezért gátolja a prolaktin szekrécióját, hím patkányokban pedig a
tesztoszteron (67,89). A szulpirid blokkolja a dopamin receptorokat (66), és a szérum prolaktin szintjének emelésén túl a tesztoszteron szintet is növeli (15).

Eredményeink azt mutatják, hogy a magasságba emelt patkányok növelik a plazma prolaktin értékét (p