Tekintse meg az e médiumban megjelent cikkeket és tartalmakat, valamint a tudományos folyóiratok e-összefoglalóit a megjelenés idején

Figyelmeztetéseknek és híreknek köszönhetően mindig tájékozott maradjon

Hozzáférhet exkluzív promóciókhoz az előfizetéseken, az indításokon és az akkreditált tanfolyamokon

A Revista Mexicana de Oftalmología (RMO) a Mexikói Szemészeti Társaság hivatalos kiadványa. Ez a magazin a magazinok egyesülésének eredménye: Annals of the Mexican Eye oftalmology Society, az Egyesület Archívuma a vakság elkerülése érdekében és a Nuestra Señora de la Luz Szemészeti Kórház értesítője. Az RMO spanyol vagy angol nyelven publikálatlan és eredeti tudományos cikkeket, áttekintő cikkeket, klinikai esettanulmányokat, kapcsolódó témájú megjegyzéseket, a szerkesztőhöz intézett leveleket és speciális részeket tesz közzé, utóbbiak kizárólag meghívásos módon, a szem klinikai, sebészeti, epidemiológiai és alapvető szempontjaival.

Indexelve:

SCOPUS, EMBASE, EXCERPTA, LILACS és PERIODICA

Kövess minket:

A CiteScore a közzétett cikkenként kapott idézetek átlagos számát méri. Olvass tovább

Az SJR egy tekintélyes mutató, amely azon az elképzelésen alapul, hogy az összes idézet nem egyenlő. Az SJR a Google oldalrangjához hasonló algoritmust használ; a publikáció hatásának mennyiségi és minőségi mértéke.

A SNIP lehetővé teszi a különböző tantárgyakból származó folyóiratok hatásának összehasonlítását, korrigálva az idézés valószínűségében a különböző tantárgyak folyóiratai között fennálló különbségeket.

  • Összegzés
  • Kulcsszavak
  • Absztrakt
  • Kulcsszavak
  • Bevezetés
  • Összegzés
  • Kulcsszavak
  • Absztrakt
  • Kulcsszavak
  • Bevezetés
  • Anyag és módszerek
  • Eredmények
  • Az eredmények megbeszélése és értelmezése
  • Következtetések
  • Finanszírozás
  • Összeférhetetlenség
  • Köszönöm
  • Bibliográfia

kimutatásra

A blepharitis, a kötőhártya-gyulladás és a keratitis diagnózisához használt laboratóriumi módszerek a friss vizsgálatoktól kezdve a paraziták felkutatásáig, a foltoktól a mikrobiológiai tenyészetekig, amelyek akár 2 hétig is eltarthatnak az eredmény eléréséhez.

Végezzen el egy PCR-t a gram-pozitív és gram-negatív baktériumok és gombák kimutatására olyan módszer alkalmazásával, amelyet korábban a Centro de Investigación Biomédica de La Fundación Kórház Nuestra Señora de la Luz I.A.P. (CIB-HOL) az Axygen/Maxygene termosziklerrel.

DNS-extrakciót végeztünk gram-pozitív, gram-negatív baktériumok és gombák mikrobiológiai tenyészeteiből. A módszer érzékenységének meghatározásához soros hígításokat végeztek. A gombák és baktériumok PCR-jét végeztük. Közös feltételeket kerestek az egylépéses PCR elvégzésére.

A DNS-hígítások segítségével amplifikációs terméket kaptunk 0,12 ng baktérium-DNS és 0,15 ng gomba-DNS felhasználásával.

A PCR technika nagyon fontos eszköz a szemfertőzést okozó baktériumok és gombák DNS-ének kimutatására. Lehetővé teszi az etiológiai ágens genetikai anyagának felerősítését, és megkönnyíti annak megfigyelését, kevesebb idő alatt eléri az eredményeket, mint a hagyományos technikákkal.

A blepharitis, a kötőhártya-gyulladás és a keratitis diagnosztizálásához használt laboratóriumi módszerek, a friss vizsgálatoktól kezdve a paraziták, grammfoltok és mikrobiológiai kultúrák felkutatásáig, akár két hétig is eltarthatnak az eredmény elérése érdekében.

A gombák, valamint a gram-pozitív és gram-negatív baktériumok kimutatására szolgáló PCR megvalósítása egy korábban közölt módszerrel, a Fundación Hospital Nuestra Señora de la Luz I.A.P. Biomedical Research Center molekuláris biológiai laboratóriumához adaptálva. (CIB-HOL), az Axygen/Maxygene termociklerrel.

A PCR-hez Gram-pozitív, Gram-negatív és gombák mikrobiális tenyészeteiből származó DNS-t nyertünk. A módszer érzékenységének meghatározásához soros hígításokat hajtottunk végre. A gombák és baktériumok PCR-jét végeztük. Egy lépésben kerestük a PCR általános feltételeit

Amikor DNS-hígításokat használtunk, a PCR 0,12 ng-ra érzékeny volt a baktériumok DNS-ére és 0,15 ng a DNS-gomba elleni érzékenységre.

A PCR technika nagyon fontos molekuláris biológiai eszköz a szemfertőzésért felelős baktériumokból és gombákból származó DNS kimutatására. Ez a módszer lehetővé teszi az etiológiai szer genetikai anyagának amplifikálását, és az eredményeket rövidebb idő alatt érik el, mint a hagyományos technikákat alkalmazva.

A szem a fény befogásáért felelős szerv, amely a látás kezdeti folyamata, és anatómiai helyzetének köszönhetően folyamatosan különféle kórokozóknak van kitéve. Rendelkezik azonban anyagok, köztük a könny előállítására, amely nagyszámú kémiai vegyületet tartalmaz, például citokineket, enzimeket, lipideket és elektrolitokat, amelyek képesek immun gátat képezni, hogy megakadályozzák a fertőzést kiváltó mikroorganizmusokat 1 . A szemfertőzés eredete traumák, műtétek, kontaktlencsék és egyéb olyan betegségek eredménye lehet, amelyekben az immunrendszer sérül, elősegítve a kórokozók kialakulását. A szemfertőzéseket baktériumok, gombák, vírusok vagy paraziták okozzák. A szemfertőzéseknek sokféle típusa van, és a leggyakoribbak közül említhetjük a kötőhártya-gyulladást, a keratitist és a blepharitist vagy a szemhéjak krónikus gyulladását, amelyet főként staphylococcusok okoznak. .

A szaruhártyát magában foglaló szemműtétek bizonyos kockázatot jelentenek a mikroorganizmusok általi fertőzésre, amelyek általában a szem felszínén élnek. Beszámoltak arról, hogy a leggyakrabban izolált mikroorganizmusok gram-pozitív baktériumok, a S. epidermidis foglalja el az első helyet a gyakoriságban, amely a szemfelszín szokásos flórájából származik 5,10,11 .

Vannak más olyan betegségek, amelyek összefüggenek a szemfertőzés kockázatával. A szaruhártya-hám megváltozásával járó betegségek közül megemlíthetjük többek között az autoimmun betegségeket, mint például a pajzsmirigy-orbitopátia, a Sjögren-szindróma és a pemphigoid. Az olyan szisztémás betegségek, mint a diabetes mellitus, a kollagén betegségek, a metabolikus szindróma vagy az immunszuppressziós rendszert érintő állapotok szintén hajlamosak a fertőző keratitis kialakulására a humorális és/vagy sejtes védekezés csökkenése miatt 5,12–14 .

Általánosságban elmondható, hogy a kötőhártya-gyulladás, a blepharitis és a fertőző keratitis kórokozóként érintett mikroorganizmusok bakteriális eredetűek, túlnyomórészt gram-pozitívak 5. A gombák az esetek körülbelül 5-30% -át teszik ki, és a paraziták tekintetében a jelentett százalékok alacsonyabbak, és 1-15% -nak tulajdonítják őket. A blepharitis leggyakoribb parazitája a Demodex folliculorum, míg a parazita keratitis az Acanthamoeba sp 5,15,16 .

A blepharitis, a kötőhártya-gyulladás és a keratitis diagnosztizálásához használt laboratóriumi módszerek a friss vizsgálatoktól kezdve a paraziták és foltok felkutatásán át a mikrobiológiai tenyészetekig terjednek, amelyek akár 2 hétig is eltarthatnak az eredmény eléréséhez 17, 18. A mikroorganizmusok jelenléte nagyon kicsi lehet, és ez a fertőzés klinikai megjelenésétől függ; Például őszinte szaruhártya-tályogok fordulhatnak elő olyan indolensebb formákban, mint például a kristályos keratopathia, amelyben intrastromális infiltrátum található, de minimális gyulladásos reakcióval és a klasszikus mikrobiológia elvégzéséhez elégtelen mintával 19–23. Emiatt molekuláris biológiai módszereket fejlesztettek ki a 24–26-os mikrobiológiai diagnózisra. A közvetlen polimeráz láncreakciót (PCR) vírusok, baktériumok, gombák és paraziták esetében alkalmazták; Beágyazott PCR a baktériumok azonosításához; és valós idejű PCR minden típusú mikroorganizmus számára 27–31 .

2000-ben Jaegger et al. és Carrol és mtsai. PCR-módszert írt le a gombák és a baktériumok kimutatására a szemfolyadék mintákban 32, 33. Ezek a vizsgálatok a módszer nagy érzékenységéről számolnak be, ami nagyon fontos a szem mikrobiológia diagnosztizálásában a szemészeti mintában nyerhető biológiai anyag kevés mennyisége miatt, azonban minden laboratóriumnak szabványosítania kell a munkakörülményeket, hogy kielégítő eredményeket elérni. Ennek a munkának az volt a célja, hogy reprodukálja ezeket a gombák és baktériumok kimutatására szolgáló technikákat, megteremtve az ehhez szükséges feltételeket egyetlen programban, ugyanazon feltételekkel, mind a baktériumok, mind a gombák kimutatására; Ez lerövidítené az eredmények elérésének idejét, amelyek a beteg számára előnyösek lennének a gyors és megbízható eredmény elérése érdekében. A munkát a Fundación Nuestra Señora de la Luz I.A.P. kórház Orvosbiológiai Kutatóközpontjának molekuláris biológiai laboratóriumában végezték. (CIB-HOL).

Anyag és módszerek

A beágyazott PCR-hez a baktériumok PCR-jéből kapott amplifikációs termékeket használtuk; A körülmények: 95 ° C/10 perc, majd 32 ciklus 94 ° C/30 s hőmérsékleten, 61,4/1 perc, 72 ° C/30 s és végül 72 ° C/3 perc nyúlási hőmérséklet. Valamennyi PCR-terméket 1,5% -os agarózgél-elektroforézissel azonosítottuk, 90 V 40 percig és Gelred 10X körülményekkel, hogy UVP BioLite transzilluminátorban jelenítsük meg, 302 nm-es UV-fénnyel.

A bakteriális szuszpenzióból a kapott DNS koncentrációja 4 ng/μl, míg a gombás DNS esetében 5 ng/μl volt; 3 µl (12 ng) bakteriális DNS-t és 3 µl (15 ng) gomba DNS-t használtunk a PCR-hez. Kielégítő eredményeket kaptunk az egyes PCR-ekre vonatkozóan megadott Tm felhasználásával. A baktériumok PCR-terméke megközelítőleg 1300 bázispár volt, és a program a hőciklerben 3 és 20 percig tartott (1. ábra). A gomba PCR-hez hozzávetőlegesen 700 bp-os amplifikációs terméket kaptunk, és a termikus ciklerben a PCR-futtatási program ideje 3 óra és 20 perc volt (2. ábra). A hőmérsékleti gradiens PCR-ben a gombák és baktériumok PCR-jének egyetlen kivitelezésével történő elvégzéséhez a legjobb körülmények a következők voltak: 95 ° C/10 perc, 35 ciklus 94 ° C/1 perc 56 ° C/1 perc, 72 ° C hőmérsékleten C/1 perc, végül a nyúlási hőmérséklet 72 ° C/7 perc, 3 óra és 10 perc időtartammal. Az 56 ° C-os Tm-mel mind a gomba, mind a baktériumok DNS-e amplifikálható.