Tárgyak

Ez a cikk frissült

Összegzés

Háttér:

Bizonytalan, hogy a szinkron colorectalis daganatok (S-CRC) preferenciálisan fejlõdnek-e generalizált DNS-metilációval, és rosszabb prognózisúak-e, mint a magányos CRC. Mivel a mikroszatellit instabilitás (MSI) daganatok megzavarhatják az S-CRC metiláció hatását az eredményre, ezzel a kérdéssel egy sor CRC-ben foglalkoztunk, amelyeket BRAF és MS státusz jellemez.

Mód:

A demográfiai adatokat, a klinikopatológiai nyilvántartásokat és a betegségspecifikus túlélést (DSS) 881 egymást követő reszekcióval végzett CRC-ben értékelték, és teljes kolonoszkópián estek át. Valamennyi daganatot a BRAF c.1799T> A mutáció és MS státusz alapján tipizáltuk, majd MSI CRC-ben szenvedő csíravonal mutáció után kutattunk.

Eredmények:

A szinkron vastagbélrákok (50/881, 5,7%) a IV. Stádiumú CRS mikroszatellit-stabil (MSS) (19/205, 9,3%, P = 0,001) és a HNPCC-vel (9/32, 28%, P c. 1799T>) voltak társítva. Az egyik mutáció (HR 2,16; 95% CI 1,25–3,73; p = 0,01) az MSS CRC halálfázisától független előrejelzője volt. Az MSI MRI-ben szenvedő betegek betegségspecifikus túlélését az S-CRC nem befolyásolta (HR 0,74, 95% CI 0,09 - 5,75, P = 0,77).

Következtetés:

A stabil mikroszatellit CRC-k rosszabb prognózissal rendelkeznek, ha S-CRC-t vagy szinkron előrehaladott adenomát diagnosztizálnak. Az SMS szinkron előrehaladott neopláziájának előfordulása és fokozott agresszivitása nincs összefüggésben a BRAF mutációval .

Fő

Két vagy több primer kolorektális karcinómát fedeznek fel az összes újonnan diagnosztizált vastagbélrákban (CRC) szenvedő 2–5% -ban (Adloff és mtsai, 1989; Passman és mtsai, 1996; Chen és Sheen-Chen, 2000; Oya és mtsai, 2003; Papadopoulos és mtsai, 2004; Latournerie és mtsai, 2008; Nosho és mtsai, 2009; Mulder és mtsai, 2011). A szinkron vastagbélrák (S-CRC) klinikai entitásként történő elismerése felhívta a figyelmet arra, hogy CRC-reszekció alatt álló betegeknél a teljes vastagbél pontos perioperatív vizsgálata kötelező. Az azonban továbbra is bizonytalan, hogy az S-CRC prognosztikai és molekuláris jellemzői eltérnek-e a magányos CRC-től.

Az S-CRC-ben szenvedő betegek jellemzőit és kimenetelét vizsgáló eset-kontroll vizsgálatok ellentmondásos eredményeket szolgáltattak. Férfi nem (Oya és mtsai, 2003; Latournerie és mtsai, 2008; Mulder és mtsai, 2011), idős kor (Passman és mtsai, 1996; Papadopoulos és mtsai, 2004; Wang és mtsai, 2004; Mulder és mtsai, 2011), az egymás mellett létező adenomák (Chen és Sheen-Chen, 2000; Latournerie és mtsai, 2008) és a rosszabb túlélés (Oya és mtsai, 2003; Nosho és mtsai, 2009; Mulder és mtsai, 2011) néhány sorozatban társultak az S-CRC-hez, de másokban nem. Ezek az inkonzisztenciák valószínűleg elfogultságot tükröznek az indexes esetek kiválasztásában, valamint a kontrollok toborzásában a magányos CRC-vel. Különösen a különböző sorozatokban előfordulhat változó prevalencia a mikroszatellit instabilitással (MSI) rendelkező rákos megbetegedésekben, amelyek többszörös elváltozásokhoz kapcsolódnak (Pedroni et al., 1999; Dykes et al., 2003.; Nosho és mtsai. hanem jobb prognózissal is (Gryfe és mtsai, 2000; Malesci és mtsai, 2007).

Tekintettel az eredmény és a különféle molekulaprofilok bonyolult kölcsönhatásaira, nyilvánvaló, hogy az S-CRC prognosztikai jelentőségét csak a CRC egyedi molekuláris alcsoportjainak elemzésével lehet biztonságosan felmérni. Ezenkívül az elemzést ki kell terjeszteni a szinkron fejlett adenomákra is, amelyek metakron CRC-vel is társulnak (Moon és mtsai, 2010). A szinkron adenómák vagy az S-CRC retrospektív keresését a perioperatív kolonoszkópiák regisztereiben végezték 881 egymást követő betegben, akiknek a reszektált CRC-t eredetileg molekuláris alosztályokba sorolták a mikroszatellit státus és a BRAF alapján. Ezután értékelték az előrehaladott szinkron neopláziában szenvedő betegek klinikopatológiai jellemzőit és eredményét.

Anyagok és metódusok

A CRC populációjának és alcsoportjainak vizsgálata szinkron neoplázia miatt

A vizsgálat célja 1000 olyan egymást követő páciens bevonása volt, akiket CRC-n végeztek reszekciós műtéten a Humanitas Klinikán és Kutatóközpontban 1998. február 2. és 2006. április 6. között. A kizárási kritériumok a következőkre korlátozódtak: (1) submucosalis invázió hiánya a patológia; (2) egy korábban reszektált vastagbéldaganat anasztomotikus kiújulása; (3) a családi adenomatózus polipózis diagnózisa; (4) CRC gyulladásos bélbetegséggel társítva. A protokollt az Intézet Etikai Bizottsága jóváhagyta, és a betegek személyes adatainak kezelésével kapcsolatos tájékozott beleegyezését a beutaló orvos vagy a vizsgálatban részt vevő más klinikusok szerezték meg. A nyilvántartások előzetes elemzésében 119 beteget (közülük egyiknek sem volt S-CRC) kizárták a hiányos vagy rossz minőségű perioperatív kolonoszkópia miatt, ami 881 alany végső vizsgálati populációjához vezetett.

Molekuláris tumor altípus

Az összes beteg daganatmintáját és az S-CRC betegek összes daganatát vizsgálták MSI-re. Az amszterdami II. És/vagy a Bethesda kritériumoknak (n = 279) megfelelő betegek BAT-26 mononukleotidját és BAT-25 mononukleotidját használtuk az MSI molekuláris markereiként (Hatch et al., 2005; Laghi et al., 2008). A DNS-t legalább 50% tumorsejtet tartalmazó parafinba ágyazott daganatokból vagy mikrodissszekciókból nyertük. A BAT-25 és BAT-26 lókuszt fluoreszcein primerekkel amplifikáltuk, és kapilláris gélelektroforézissel elemeztük (ABI PRISM 310 Genetic Analyzer, Applied Biosystems, Monza, Olaszország) (Aaltonen et al., 1998; Malesci et al., 2007).

Valamennyi MSI CRC-ben a nem megfelelő javítás (MMR) hibáját értékelték a hMLH1 (G-168-15 klón, BD Bio sciences, Buccinasco, Milánó, Olaszország), hMSH2 (FE11 klón, Calbiochem, Merk) nukleáris expressziójának hiányával. Millipore, Darmstadt, Németország) vagy hMSH6 (44. klón, BD Bio sciences) az immunhisztokémiában (Truninger és mtsai, 2005). Az amszterdami kritériumoknak (n = 10) megfelelő betegek MSS daganataiban is igazolták a nem megfelelő javító fehérje expresszióját. Az MSI CRC-ben szenvedő betegek csíravonal genetikai vizsgálatán estek át az MLH1, MSH2 és MSH6 mutációk az elsődleges rák MMR defektus szekvenálásával (Wahlberg és mtsai, 2002). Negatív mutációval rendelkező betegeknél a többszörös ligációs próba (probemix SALSA MLPA P003 MLH1-MSH2, probemix P248 MLH1-MSH2, probemix P072 MSH6, Medical Research Council-Holland, Amsterdam, Hollandia) amplifikációs elemzését végeztük.

Valamennyi CRC mintát megvizsgáltuk a BRAF c.1799T> One mutációra Real Time-PCR-rel TaqMan SNP genotipizáló vizsgálattal (Applied Biosystem). A TaqMan MGB szondákat az egyedi TaqMan elemző tervező eszköz (Applied Biosystem) segítségével tervezték. A riporter fluoroforokat VIC-ként választottuk ki a vad típusú allél és a mutáns allél FAM kimutatására.

A MYH gén összes exonjának szekvenálását végeztük annak érdekében, hogy értékeljük a csíravonal mutációit minden MSS S-CRC betegben. Megvizsgáltuk az összes MSS S-CRC szövetet is a szomatikus vagy csíravonal mutációk kimutatására a POLE gén 13. exonjában és a POLD1 gén 11. exonjában. .

statisztikai elemzés

A szinkron neoplazia és a CRC-index klinikopatológiai vagy molekuláris jellemzői közötti összefüggéseket a test 2 teszt, vagy adott esetben a Fisher kategorikus változókra vonatkozó pontos tesztje és a Student változók változásaival folytatott t teszt segítségével értékeltük. Az egyváltozós elemzés során az S-CRC-hez szignifikánsan kapcsolódó patológiai és molekuláris tényezőket többváltozós logisztikus regressziós elemzésbe vontuk. A túlélési görbéket Kaplan-Meier módszerrel rajzoltuk a DSS összehasonlító értékelésére szinkron colorectalis neopláziában szenvedő betegeknél. Az S-CRC-k prognosztikai szerepének, valamint a szinkron adenómák és a tumor MS/BRAF státuszának jobb felmérése érdekében Cox-arányos veszély modelleket is alkalmaztunk. Valamennyi statisztikai vizsgálat során a magányos rákban szenvedő P 0,5) betegeknél legalább egy különálló adenoma volt.

Az 1. táblázat a CRC index klinikopatológiai és molekuláris jellemzőit mutatja be, szinkron kolorektális neoplazia hiánya vagy jelenléte alapján rétegezve. A szinkron neoplazia nélküli betegekkel összehasonlítva a szinkron adenómában vagy rákban szenvedő betegek idősebbek voltak (66,4 ± 9,9 vs. 63,9 ± 11,8 év; P = 0,001), gyakrabban férfiak (66,4% vs. 53,3%; P c 1799T> Egy mutáció ennek a két változónak a szinkron, nem előrehaladott adenomával való összefüggését meghatározva, míg a BRAF státusz és az előrehaladott szinkron adenomák és az S-CRC között nem találtunk összefüggést. A 2. ábra mutatja, hogy a BRAF c.1799T mutáció> A szorosan összefügg a sporadikus MSI (37/62, 59,7% vs. 23/787, 2,9% az MSS CCS-ben; P c. 1799T> egy mutáció. S-CRC-ben szenvedő betegeknél nem mutattak ki MYH csíravonal mutációkat és nem mutattak csíra- vagy szomatikus POLE vagy POLD1 mutációkat.

Teljes méretű asztal

heterogenitása

A CRC mikroszatellit státusz és a szinkron colorectalis neoplasia kölcsönhatása e két változó TNM stádiummal való összefüggésének meghatározásában. A szinkron CRC szakaszos eloszlását összehasonlítjuk az egyetlen CRC-vel, mikroszatellit állapot szerint rétegezve. A IV. Stádium szignifikánsan társult a szinkron CRC-vel SMS daganatos betegeknél (19/39, 48,7% vs 186/748, 24,9%; P = 0,001). A IV. Stádiumú betegség gyakorisága nem volt különbség az MSS CCR-ben szenvedő betegeknél, egyidejű adenoma nélkül (124/495, 25,1%, ref.), Szinkron nem előrehaladott adenomával (36/153, 23,5%; P = 0,70) és előrehaladott szinkron adenoma (26/100; 26,0%; P = 0,84). Az MSI CRC-ben szenvedő betegek IV. Stádiumú betegségének gyakorisága nem társult S-CRC-vel (7/83, 8,4% vs 1/11, 9,1%; P = 0,88). * P-értékek χ 2-ben vagy Fisher pontos tesztje, adott esetben (IV. Szakasz másokkal szemben).

Teljes méretű kép

BRAF c.1799T> Egy mutáció szignifikánsan gyakoribb volt (P2 vagy Fisher pontos tesztje, adott esetben).

Teljes méretű kép

A 4,3 ± 2,4 éves átlagos posztoperatív nyomon követés során összesen 231 CRC-vel összefüggő halálesetet regisztráltak, a 787 SCD-ben 220-at (28,0%), a 94 beteg közül pedig csak 11-et (11,7%). BRAF c.1799T mutáció> A (P c. 1799T> A rákindex mutációja szintén megjósolta az MSS CRC okozta halálozás nagyobb kockázatát, függetlenül a szinkron előrehaladott neoplazia és a TNM stádium jelenlététől (HR 2,16; 95% CI 1,25– 3,73; P = 0,01) A szinkron előrehaladott neoplázia (HR 1,75, 95% CI 1,30–2,37, P kb. 1799T> Egy mutáció (HR 1,74, 95% CI 1,00–3,03, P = 0,05) továbbra is független prediktora volt a halál, amikor az adjuváns 5-fluorouracil-alapú kemoterápiát bevitték a többváltozós elemzésbe (2. kiegészítő anyag). Ellenkezőleg, sem a szinkron előrehaladott neoplazia, sem a tumor BRAF állapot nem befolyásolta szignifikánsan az MSI CRC-ben szenvedő betegek DSS-ét.

A CRC-ben szenvedő betegek betegség-specifikus túlélése SM státus és invazív szinkron rák szerint. A szinkron CRC szignifikánsan befolyásolta az MSS-rákos betegek betegségspecifikus túlélését, az MSI-daganatos betegekét nem (Kaplan-Meier görbék, log-rank teszt).

Teljes méretű kép

Az MSS CRC-ben szenvedő betegek betegségspecifikus túlélése szinkron colorectalis neopláziával rétegezve. A szinkron előrehaladott neoplázia jelenléte, de a szinkron nem előrehaladott adenoma jelenléte nem, negatívan befolyásolta a CRC-ben szenvedő betegek túlélését (Kaplan-Meier görbék, log-rank teszt).

Teljes méretű kép

Teljes méretű asztal

Vita

Ebben a nagy kórházi vizsgálatban az MSS CRC-ben szenvedő betegeknél lényegesen rosszabbul járt a helyzet, ha eredetileg S-CRC-t vagy akár szinkron előrehaladott adenomát diagnosztizáltak náluk. A megállapítás azért fontos, mert hozzájárul egy nagyon ellentmondásos kérdéshez, amelyet az a tény generál, hogy a legtöbb tanulmány nem ismeri fel az S-CRC és a rossz prognózis közötti összefüggést (Passman et al., 1996; Chen és Sheen-Chen, 2000; Papadopoulos és mások, 2004; Latournerie és mtsai, 2008), míg az egyetlen prospektív vizsgálat magasabb halandóságról számolt be a többszörös primer rákos betegeknél (Nosho és mtsai, 2009). Különösen a tanulmányunk egyedülálló abban, hogy megvizsgáltuk az S-CRC prognosztikai szerepét molekulárisan meghatározott CRC alcsoportokban, annak érdekében, hogy elkerüljük az MSI-rák zavaró hatását, amelyek nagyobb valószínűséggel fordulnak elő szinkron malignus daganatokként, de jobb általános prognózissal is rendelkeznek. Továbbá, a BRAF c.1799T> A mutáció, a CIMP bevett markere és a rossz prognózis (Samowitz és mtsai, 2005b; Weisenberger és mtsai, 2006) nem volt társítva az MSS S-CRC-hez, ami azt jelzi, hogy sem a az instabil kromoszomális szinkron rákok valószínűleg epigenetikai mezőhatásnak köszönhetők.

Végül tanulmányunk nem fedezett fel semmilyen MYH csíravonal mutációt, amely nem erősítette meg a korábban közölt összefüggést a homozigóta vagy heterozigóta heterozigóta mutációk és az S-CRC között (Cleary et al, 2009), sem a csíra/somnol/POLE mutációkat vagy a POLD1-et, amelyek nemrégiben voltak több CRC-vel vagy adenomával társultak (Palles és mtsai, 2013). Cleary és mtsai. (2009) a MYH mutációkat találta a BRAF c.1799T> A mutációval, mint a DNS-metiláció egyetlen markerével. Noha a BRAF státuszt erősen specifikus és reprodukálható markerként validálják metilező fenotípusú rákos megbetegedések esetén (Weisenberger és mtsai, 2006), előfordulhat, hogy a CIMP többszörös marker elemzésében nem észleltünk néhány potenciálisan azonosítható metilált daganatot. Úgy gondoljuk azonban, hogy az MSS S-CRC és a tumor metilációs állapota közötti kapcsolat hiánya sorozatunkban nem vonható kétségbe ezen korlátozás alapján. Végül a szinkron fogazott adenómákat, amelyek együtt járhatnak az előrehaladott colorectalis neoplasiával (Álvarez és mtsai, 2013), biztosan alábecsülték egy olyan sorozatban, amelyet akkor gyűjtöttek össze, amikor a "hiperplasztikus" elváltozások endoszkópos kivágása alig vagy egyáltalán nem volt tudatában.

Összefoglalva, tanulmányunk kimutatta, hogy az MSS rákos megbetegedések, amelyek a többszörösen előrehaladott elváltozások fenotípusával járnak, az S-CRC túlnyomó többségét képviselik, nem kapcsolódnak a BRAF mutációhoz, és rosszabb prognózisúak, mint a megfelelő magányos daganatok. Az előrehaladott, nem hipermutált multiplex neoplázia és a rossz prognózis közötti összefüggés fontos következményekkel járhat a posztsebészeti megfigyelés és a kiegészítő terápiás stratégiák szempontjából.

Változtassa meg a történetet

Kiegészítő információk

Képfájlok

Kiegészítő anyag 1

Word dokumentumok

Kiegészítő anyag 2

Ez a munka a közzétételre vonatkozó szabványos licenc alapján jelenik meg. 12 hónap elteltével a mű ingyenesen elérhető lesz, és a licencfeltételek Creative Commons Attribution-NonCommercial-Share Alike 3.0 Unported licencre váltanak.