BOLÍVAR SIMÓN EGYETEM Posztgraduális Tanulmányok ÉLELMISZERTUDOMÁNY ÉS Táplálkozáskoordinációs Mesterfokozat ÉLELMISZER-TÁMOGATÁSI MEGFELELÉS A KINCHONCHO-FEHÉR (Cajanus cajan) ALERGENIKAI KAPACITÁSA Gabriel Josález Grauon 2010. október
BOLÍVAR SIMÓN EGYETEM Posztgraduális Tanulmányok ÉLELMISZERTUDOMÁNY ÉS TÁPLÁLKOZÁS KOORDINÁLÁSI Mester ÉLELMISZERTUDOMÁNYI ALKALMÁNYI KAPACITÁSA A CINCHONCHO-FEHÉR (Cajanus cajan) Egyetemi végzettség: Simón Gabriel Partuval a professzor tanácsa: Alexia Torres oktató, Pedro Aso Cotutor professzor, 2010. október
iv DEDIKÁCIÓ Szeretettel Rosa González anyám, valamint nagyszüleim, Pedro González és Mercedes Prada de González emlékére, akik mindig életben maradnak a szívemben. Tanításaik, értékeik és elveik a legnagyobb kincsek, amelyeket nekem tudtak ajánlani.
viii 2.5.2) Az endotoxinok kimutatása és mennyiségi meghatározása a 38 Gel-Clot módszerrel. 2.5.3) Intraperitoneális szenzibilizációs modell (i.p). 2.5.4) Homológ passzív bőr anafilaxia (ACPH) vizsgálat. 2.6) Indirekt enzimhez kapcsolt immunszorbens teszt az egér IgG kimutatására (ELISA). 42 2.6.1) Az anti-egér igg konjugátum optimális hígításának meghatározása. 42 2.6.2) Az antigén és antiszérum optimális hígításának meghatározása. 42 2.6.3) A közvetett ELISA általános protokollja specifikus egér IgG-k kimutatására . 44 2.7) Statisztikai elemzés . 45 III. FEJEZET: EREDMÉNYEK ÉS MEGBESZÉLÉS. 47 3.1) A quinchoncho fehérjék kémiai elemzése. 47 3.2) Fehérje elektroforézis 47 3.3) Homológ passzív kután anafilaxia (ACPH) vizsgálat. 3.4) Indirekt ELISA az egérspecifikus IgG kimutatására. 3.4.1) Az anti-egér igg konjugátum optimális hígításának meghatározása. 3.4.2) Indirekt ELISA az egér szérum hígításának és az antigén koncentrációjának meghatározásához. 65 3.4.3) A közvetett ELISA általános protokollja a specifikus egér IgG kimutatására. 66 IV. FEJEZET: KÖVETKEZTETÉSEK ÉS AJÁNLÁSOK . 71 4.1) Következtetések . 71 4.2) Ajánlások . 72 V. FEJEZET: HIVATKOZÁSOK . 73 VI. FEJEZET: MELLÉKLETEK 80
ÁBRÁK MÉRLEGE ix Ábrák 1.1. Nem toxikus mellékhatások az ételekkel. 20 3.1. Száraz, zöld baromfi SDS-PAGE fehérjekivonatai. 48 3.2. SDS-PAGE Száraz zöld galambborsó, csillagfürt és szójabab fehérjekivonatai 48 3.3. A zöld baromfifehérje ACPH-vizsgálata. 54 3.4. ACPH-teszt száraz baromfifehérjéhez. 56 3.5. Csillagfürt fehérje ACPH vizsgálata. 57 3.6. Közvetlen ELISA a konjugátum optimális hígításának meghatározásához. 64 3.7. Indirekt ELISA az egér szérum hígításának és az antigénkoncentráció meghatározásához. 65 3.8. Specifikus IgG-szint a zöld baromfifehérjével szemben. 66 3.9. Specifikus IgG-szint a száraz baromfifehérjével szemben. 67 3.10. A csillagfürt fehérjével szembeni specifikus IgG-szintek. 68
RÖVIDÍTÉSEK FELSOROLÁSA x Ac: antitestek. ACPH: homológ passzív bőr anafilaxia. Ag: antigén. ANOVA: varianciaanalízis. AOAC: Hivatalos analitikus vegyészek szövetsége. CD: a differenciálás klasztere. CEE: standard endotoxin-kontroll. HCM: fő hisztokompatibilitási komplex. APC: antigént bemutató sejt. COVENIN: Venezuelai Ipari Szabványügyi Bizottság. DS: szórás. ELISA: enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat. FAO: Élelmezési és Mezőgazdasági Szervezet. IAA: vízfelszívási index. IFBC: Nemzetközi Biotechnológiai Tanács. Ig: immunglobulinok. IL: interleukin. ILSI: Nemzetközi Élettudományi Intézet. ISO: Nemzetközi Szabványügyi Szervezet IT: tripszin inhibitorok. ITAM: tirozin immunreceptor. HACCP: veszélyelemzés és kritikus kontrollpontok. LAL: a Limulus polyphemus amebocita-lizátuma. LPS: lipopoliszacharidok. MALT: a nyálkahártyához kapcsolódó limfoid szövetek. MG: geometriai átlag. nsltps: nem specifikus lipidszállító fehérjék. PCR: polimeráz láncreakció. PER: fehérje hatékonysági arány. RCB: B-sejt antigén receptor. S: svedberg. SSF: fiziológiás sóoldat. TGF-β: tumor növekedési faktor β. EU: endotoxin egységek. WHO: Egészségügyi Világszervezet.