A nefrológia a spanyol Nefrológiai Társaság hivatalos kiadványa. A folyóirat cikkeket közöl a nephrológiával, a magas vérnyomással, a dialízissel és a vesetranszplantációval kapcsolatos alapvető vagy klinikai kutatásokról. A folyóirat követi a szakértői értékelési rendszer előírásait, így minden eredeti cikket a bizottság és a külső bírálók is értékelnek. A folyóirat spanyol vagy angol nyelven írt cikkeket fogad el. A nefrológia az International Journal of Medical Journal Editors (ICMJE) és az Etikai Kiadványok Bizottsága (COPE) publikációs szabványait követi.

Indexelve:

MEDLINE, EMBASE, IME, IBEC, Scopus és SCIE/JCR

Kövess minket:

Az impakt faktor az előző két évben a kiadványban megjelent művek átlagosan egy évben kapott idézetek számát méri.

A CiteScore a közzétett cikkenként kapott idézetek átlagos számát méri. Olvass tovább

Az SJR egy tekintélyes mutató, amely azon az elképzelésen alapul, hogy az összes idézet nem egyenlő. Az SJR a Google oldalrangjához hasonló algoritmust használ; a publikáció hatásának mennyiségi és minőségi mértéke.

A SNIP lehetővé teszi a különböző tantárgyakból származó folyóiratok hatásának összehasonlítását, korrigálva az idézés valószínűségében a különböző tantárgyak folyóiratai között fennálló különbségeket.

  • Összegzés
  • Kulcsszavak
  • Absztrakt
  • Kulcsszavak
  • Bevezetés
  • Összegzés
  • Kulcsszavak
  • Absztrakt
  • Kulcsszavak
  • Bevezetés
  • Anyag és módszerek
  • Állatmodell és meghatározások
  • Urémiás toxinokkal történő kezelés és meghatározások
  • Statisztikai elemzés
  • Eredmények
  • Az adeninben gazdag étrendben lévő egereknél egyszerre alakul ki krónikus vesebetegség és érkárosodás
  • Az urémiás toxinok az extracelluláris mátrixfehérjék és a profgibrotikus citokin tgf-β1 expresszióját indukálják a haosmc sejtek által
  • Vita
  • Következtetés
  • Finanszírozás
  • Szerzőség
  • Összeférhetetlenség
  • Bibliográfia

toxinokból

Krónikus vesebetegségben szenvedő betegek urémiás toxinok felhalmozódását mutatják be, amelyeket kardiovaszkuláris mortalitással járó kórokozóként azonosítottak, ami ebben a betegcsoportban nagyon magas. A progresszív veseelégtelenségben és az ezzel járó érkárosodásban gyakori jelenség az extracelluláris mátrix (ECM) fehérjék rendellenes felhalmozódása a vese- vagy érrendszerekben.

Az urémia vagy az urémiás toxinok hozzájárulása a citokinek és az ECM termeléséhez az urémiás állatok vagy az emberi aorta simaizomsejtjeinek aortáiban (HAOSMC).

Anyagok és metódusok

Adeninben (0,2%) gazdag étrend által kiváltott urémiás egereket használtunk 2, 4 vagy 6 hétig. A vesefunkciót diurézissel, plazma kreatinin- és plazma-karbamid-nitrogénszinttel, valamint a nátrium- és érkárosodás frakcionális kiválasztásával értékeltük hisztológia és fehérje expresszió alapján RT-qPCR segítségével. In vitro a HAOSMC-ket inkubáltuk urémiás toxinokkal: p-krezol 10-100 (µg/ml) és indoxil-szulfát 25-100 (µg/ml), önmagukban vagy egyidejűleg. A fehérje expresszióját Western blot és konfokális mikroszkóppal értékeltük.

Az adenin beadása progresszív vesekárosodást okozott egerekben, megvastagodott az aorta falán, és fokozta a TGF-β1 és ECM fehérjék expresszióját. A magas és kombinált dózisú toxinok a TGF-β1 és az ECM fehérjék expresszióját is kiváltották a HAOSMC sejtek által.

Az adeninben vagy nagy dózisú urémiás toxinokban gazdag étrend által előidézett urémia az ECM fehérjék rendellenes lerakódását indukálta az érfalakon, illetve HAOSMC által történő termelésüket. Az e kórélettani folyamat alapjául szolgáló mechanizmusok megértése hasznos lehet a krónikus vesebetegség előrehaladásával járó szív- és érrendszeri károsodások megelőzésében, ez az állapot egyelőre irreverzibilis, és néha néma a diagnózisáig haladó állapotban.

Krónikus vesebetegségben szenvedő betegeknél uraemiás toxinok halmozódnak fel, amelyeket kardiovaszkuláris halálozással összefüggő kórokozóként azonosítottak, ami nagyon magas ez a betegcsoport. A progresszív veseelégtelenség és az ezzel járó érkárosodás közös jelensége az extracelluláris mátrix (ECM) fehérje rendellenes felhalmozódása a vese vagy érrendszerben.

Az uraemia vagy az uraemiás toxinok hozzájárulása a citokininek és az ECM termeléséhez az uraemiás állatok vagy emberi aorta simaizomsejtek (HASMC) aortáiban.

Anyagok és metódusok

Az egereket adeninben (0,2%) gazdag étrend által kiváltott urémiával alkalmaztuk 2, 4 vagy 6 hétig. A vesefunkciót a vizelet térfogatának, a kreatinin plazmaszintjének, a karbamidnak, a nátrium frakcionális kiválasztásának és az érkárosodásnak a hisztológia, valamint a fehérje expressziója RT-qPCR segítségével értékeltük. A HASMC-ket in vitro inkubáltuk uraemiás toxinokkal: p-krezol 10-100 (μg/ml) és indoxil-szulfát25-100 (μg/ml) önmagában vagy egyidejűleg. A fehérje expresszióját Western blot és konfokális mikroszkóppal értékeltük.

Az adenin beadása progresszív vesekárosodást okozott az egerekben, megvastagodott az aorta falán, és növelte a TGF-β1 és ECM fehérjék expresszióját. A toxinok nagy dózisban és kombinálva a TGF-β1 és ECM fehérjék expresszióját is indukálták a HASMC-k által.

Az adeninben gazdag étrend vagy a nagy dózisú uraemiás toxinok által termelt uraemia az ECM fehérjék rendellenes lerakódását az érfalban vagy annak HASMC-k általi termelését indukálta. Az e kórélettani folyamat alapjául szolgáló mechanizmusok megértése hasznos lehet a krónikus vesebetegség, egy betegség előrehaladásával járó kardiovaszkuláris károsodások megelőzésében, amely pillanatnyilag irreverzibilis és időnként csendes, amíg a diagnózis előrehaladott stádiumban van.

Ennek a munkának az volt a célja, hogy elmélyítse az urémiás betegek szérumában felhalmozódó toxinok hozzájárulását az érkárosodáshoz és különösen az ECM rendellenes lerakódásához az érszövetekben. Ehhez a progresszív CKD állatmodelljét alkalmaztuk adeninben gazdag étrend beadásával, vagy humán aorta simaizomsejtek (HAOSMC) urémi toxinokkal történő inkubálásával.

Anyag és módszerek Állatmodell és meghatározások

A plazma és a vizelet metabolitjait kereskedelmi készletekkel határoztuk meg, a gyártó utasításai szerint: kreatinin és plazma karbamid-nitrogén (Arbor Assays LLC, Ann Arbor, MI, Egyesült Államok). A nátrium frakcionált kiválasztásának kiszámításához plazma- és vizelet-nátriumion-koncentrációt (Sodium Assay Kit, Abcam, Cambridge, UK) használtunk. A spektrofotometriás meghatározásokat a Victor X4 multimódusú lemezolvasóval végeztük (PerkinElmer, Waltham, MA, Egyesült Államok).

Urémiás toxinokkal történő kezelés és meghatározások

A HAOSMC-t 5 szervdonor aortájának enzimatikus disszociációjával állították elő, a spanyol jogszabályi előírásoknak megfelelően, az Universitario de Getafe Kórház Etikai Bizottságának jóváhagyásával, a korábban leírtak szerint 15, és Dr. Sánchez- Ferrer. A sejteket 10% borjúszérummal, L-glutaminnal, amfotericinnel, penicillinnel és sztreptomicinnel kiegészített DMEM táptalajban tartottuk. A kísérletekhez a HAOSMC-t 3–10. Passzustól humán szérummal (AB szérum; BioWhittaker, Walkersville, MD, Egyesült Államok) tenyésztettük 2,5% -on 24 órán át, és urémiás oldott anyagokkal p-krezollal (pc) és IS-vel inkubáltuk. (Sigma), az urémiás tartomány koncentrációinál alkalmazva: IS 25 és 100 μg/ml és pc 10 és 100 μg/ml, önmagában vagy egyidejűleg alacsony és magas koncentrációkban (IS + pc), változó ideig.

A kezelések után a sejtfehérje-tartalmat hagyományos Western blot 16 alkalmazásával határoztuk meg, primer antitestekkel TGF-β1, kollagén I vagy fibronektin (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, Egyesült Államok) vagy TGF-β1 ellen immunfluoreszcenciával, Leica-val. 17 konfokális mikroszkóp. .

Az összes adatot GraphPad Prism szoftverrel elemeztük. Az eredményeket átlag ± SEM-ben fejezzük ki. Mivel az állatok vagy kísérletek száma soha nem volt nagyobb 10-nél, összehasonlításokat végeztek nem parametrikus statisztikákkal, Kruskal-Wallis tesztet alkalmazva Mann-Whitney utópróbával (párosítatlan adatok) vagy Friedman tesztet Wilcoxon utópróbával (párosítva). adat). A p 0,05 értéket szignifikánsnak tekintettük.

Eredmények Az adeninben gazdag étrendben lévő egereknél egyszerre alakul ki krónikus vesebetegség és érkárosodás

A vesefunkció összehasonlító elemzése a kontroll állatok és az adeninnel táplált állatok között.

Paraméterek 0 hét 2 hét 4 hét 6 hét
Diurézis (μl/24 óra)
Ellenőrzés 432 ± 49 421 ± 52 445 ± 48 439 ± 48
Adenine 431 ± 56 3 968 ± 524 *, ** 6 382 ± 615 *, ** 6,115 ± 627 *, **
Kreatinin plazma (mg/dl)
Ellenőrzés 0,28 ± 0,07 0,26 ± 0,1 0,31 ± 0,06 0,25 ± 0,02
Adenine 0,29 ± 0,06 0,63 ± 0,13 *, ** 0,70 ± 0,12 *, ** 0,86 ± 0,07 *, **
Plazma-karbamid-nitrogén (mg/dl)
Ellenőrzés 24 ± 2 23, ± 4 26 ± 4 24 ± 2
Adenine 27 ± 4 86 ± 20 *, ** 109 ± 23 *, ** 126 ± 8 *, **
A nátrium frakcionált kiválasztása (%)
Ellenőrzés 0,44 ± 0,03 0,42 ± 0,02 0,43 ± 0,03 0,38 ± 0,06
Adenine 0,45 ± 0,02 1,07 ± 0,28 *, ** 1,09 ± 0,21 *, ** 1,63 ± 0,49 *, **

Az egereket 2, 4 vagy 6 hétig standard táplálékkal (kontroll) vagy adeninben gazdag adeninnal (adenin) tápláltuk. A vesefunkciót a diurézis, a plazma kreatinin, a plazma karbamid-nitrogénszint és a frakcionált nátrium-kiválasztás mérésével határoztuk meg. Az értékeket átlag ± SEM-ként ábrázoljuk.

p 0,05 vs. 0. hét.

p 0,05 vs. A kezelés egyidejű kontrollja. n = 5 állat/csoport.

Az adeninben gazdag étrend által kiváltott CKD-s egerek érrendszeri károsodást okoznak. Az egereket 6 hétig etettük vagy a szokásos étrenddel (Kontroll), vagy az adeninben gazdag étrendben (Adenin). A) Az aortákat hematoxilin-eozinnal festettük. A reprezentatív változások láthatók. A kontroll egerekben nem észleltek elváltozásokat. Vegye figyelembe a közeg (csillag) megvastagodását az adenin egerek aortáiban. Méretarány: 100 μm. Nagyítás × 20. B) Az átlagvastagság és a fénysugár morfometriai elemzése az ImageJ szoftverrel, és annak arányának kiszámítása. Az átlagos sugár az 5 különböző irányú független mérés átlaga. Az értékeket átlag ± SEM-ként ábrázoljuk. 1 p 0,05 vs. Ellenőrzés. n = 5 állat/csoport.

Az adeninben gazdag étrenddel indukált CKD-s egerek a profibrotikus citokin TGF-β1 és extracelluláris mátrix gének fokozott expresszióját mutatják az aortában. Az egereket 2, 4 vagy 6 hétig etettük szokásos étrenddel (Kontroll, fekete karikák) vagy adeninben gazdag étrenddel (Adenin, fekete háromszögek). Az aortában a TGF-β1 (A), a kollagén i (COL I, B) vagy a fibronektin (C) mRNS szintjét RT-qPCR segítségével határoztuk meg. A teljes β-aktin szintet meghatároztuk megfelelő endogén kontrollként. Az értékek az átlag ± SEM vs. Ellenőrzés. * p 0,05 vs. 2 hét, 1 p 0,05 vs. Kontroll, a kezelés egyidejűleg. n = 5 állat/csoport.

Nagy dózisú urémiás toxinok indukálják a profibrotikus citokin TGF-β1 vagy extracelluláris mátrixfehérjék expresszióját a vaszkuláris simaizomsejtekben. Az emberi aorta simaizomsejtjeit 2,5% humán szérummal kiegészített táptalajjal inkubáltuk 24 órán át. Ezt követően 2, 4, 6 vagy 24 órán át (A, C és D) vagy 24 órán át (B) kezelték őket urémiás toxinokkal: indoxil-szulfát (IS 100 μg/ml), para-krezol (pc 100 μg/ml ) vagy mindkettő keveréke (IS + pc 100 μg/ml). A TGF-p1 (A), az i kollagén (COL I, C) és a fibronektin (D) reprezentatív Western-blotjait mutatjuk be. A GAPDH szintjét meghatároztuk megfelelő endogén kontrollként. A sávok a normalizált blotok denzitometriai elemzésének értékeit mutatják az endogén kontrollhoz képest. A TGF-β1 expresszióját immunfluoreszcenciával (B) elemeztük. Konfokális mikroszkóppal (× 100) nyert fényképek reprezentatív képei láthatók. Az értékeket átlag ± SEM-ként ábrázoljuk. * p 0,05 vs. Kontroll (CT, kezeletlen sejtek).

A vizsgálat fő megállapításai az voltak, hogy az urémia indukálja a profibrotikus citokin TGF-β1 expresszióját és az ECM fehérjék felhalmozódását az egerek aortáiban, amelyekben a progresszív urémiát dús táplálkozási modell indukálta. az urémiás toxinok ugyanezen fehérjék expresszióját indukálják a HAOSMC sejtekben.

Végül az ebben a vizsgálatban alkalmazott toxinkoncentrációk az urémiás betegeknél jelentett tartományon belül vannak (1-100 μg/ml) 28, képesek elérni a szérum összes értékét 236 és 105 μg/ml IS és p-CS esetén., illetve 28-as hemodialízisben részesülő betegeknél, illetve 4,9 és 46 μg/ml-nél alacsonyabb IS és p-CS esetén, olyan CKD-s betegeknél, akik nem részesülnek dialízisben, amelyekről nagyon kevés információ áll rendelkezésre. Ezenkívül mindkét toxin magas szintjét figyelték meg az 1-5. CKD stádiumú betegeknél, amikor progresszív vs. nem haladók 16. Eredményeink, mind in vitro, mind in vivo, azt mutatják, hogy nagyobb adagokban, vagy időnként 4 hetes adenin esetén jelentősen megnő az ECM fehérjék termelése és/vagy felhalmozódása.

Jelen munkában először bizonyítottuk, hogy a végstádiumú CKD-ben szenvedő betegeknél felhalmozódó urémiás toxinok a HAOSMC-k által indukálják a citokin TGF-β1 és ECM fehérjék expresszióját, ami megmagyarázhatja az érkárosodás és az ECM mechanizmusát. in vivo talált akkumuláció zajlik az adeninben gazdag étrend által kiváltott progresszív CKD modellben.

Ezt a munkát a Carlos III Egészségügyi Intézet (ISCIII) és a FEDER alapjai (PI14/02075, PI17/00625, PI17/01513), a FEDER alapjai és az ISCIII RETIC REDinREN programok (RD12/0021/0006 és RD16/0009/0018) finanszírozták. ), Madridi Autonóm Közösség (NOVELREN-CM REF: B2017/BMD-3751), Alcalá Egyetem (CCG2016/BIO-043) és a Senefro Alapítvány (Senefro-2016) az LCB-nek, valamint a Renal Iñigo Álvarez de Toledo Alapítvány ( FRIAT).

Diego Rodríguez-Puyol és Laura Calleros osztják e munka irányát.

Összeférhetetlenség

A szerzők kijelentik, hogy nincsenek összeférhetetlenségük.