normál

  • Összegzés
  • Fő
  • Anyag és módszerek
  • Eredmények
  • Kifejezés kifejezése PAX8 normális felnőtt vese, ureter és húgyhólyag esetén
  • Kifejezés kifejezése PAX8 vese hámdaganatokban
  • Kifejezés kifejezése PAX8 a vesemedence, az ureter és a húgyhólyag urotheliális carcinomájában
  • Kifejezés kifejezése PAX8 metasztatikus RCC-ben
  • Vita

Összegzés

Fő

A sejtsor-specifikus transzkripciós faktorok a közelmúltban jelentek meg az emberi tumorok értékes diagnosztikai markereiként. Ezek a fehérjék korlátozott típusú embrionális szövetekben expresszálódnak, és szükségesek e szövetek növekedéséhez és differenciálódásához erősen specializált szövetekké vagy szervekké. Mivel egyes fehérjék továbbra is differenciált szövetekben expresszálódnak a felnőtt élet során, vagy azonos sejtvonalú daganatos szövetekben, ezeknek a fehérjéknek a kimutatása jelezheti a tumor elsődleges helyét vagy differenciálódási tulajdonságát. Ebben a kategóriában jól megalapozott diagnosztikai markerek a TTF-1, 1, 2 CDX2, 3 MITF, 4 és a myogenin. 5, 6

A vesesejtes karcinóma (RCC) hajlamos a vaszkuláris invázióra és a távoli áttétekre. Az esetek jelentős részében extrarenalis növekedés vagy metasztázis fordul elő a diagnózis felállításakor vagy a műtét után. Különböző szövettani jellemzői miatt az áttétes RCC diagnosztikai kihívás lehet, és megerősítéséhez gyakran kiegészítő teszteket, például immunhisztokémiát igényel. 8 Számos gyártó, köztük a citokeratinok (CK), CK7, CK20, EMA, vimentin, 9 c-kit, 10 P504S, 11 RCC marker, 12, 13 aquaporin-1, 14 CD10, 15 és karbonanhidráz 9 (CAIX) 16, 17-et használtak különböző paneleken, változó érzékenységgel és specifitással.

Anyag és módszerek

Száznegyvenhárom primer és 39 metasztatikus vese hámdaganatot alkalmaztak ebben a vizsgálatban. Az elsődleges vese hámdaganatminták radikális nephrectomia mintákból származnak, és öt szövetből álló mikrorétegeken állítják össze, mindegyik esetben három reprezentatív 1 mm-es maggal. Metasztatikus daganatokból származó hagyományos szövetmetszeteket alkalmaztunk. A húgyhólyag negyven urotheliális karcinómája szintén egyetlen szöveti mikroszkópba került, amelyet ugyanúgy hoztak létre, mint az elsődleges vese hámdaganatok esetében. A normál szövetkontroll 40 nem befolyásolt vese parenchima magot tartalmazott a szövetmikrosávokban, valamint a nem érintett vesemedencei területek szövetszelvényeit (N = 5), uretereket (N = 5) és a húgyhólyagot (N = 10).

Az immunhisztokémiai PAX8 festést Dako önfestéssel végeztük nyúl anti-PAX8 poliklonális antitesttel (1: 100) (Poteintech, Inc., Chicago, IL, USA). Röviden, paraffinba ágyazott szövetrészeket (5 μm vastagságot) nyertünk TMA-ból vagy szövetblokkokból, és egy éjszakán át 60 ° C-os sütőben sütöttünk. A metszeteket szekvenciálisan paraffinmentesítettük és dehidráltuk PRO-tisztítóval. PAR (Anatech, Battle Creek, MI, USA) USA) Az alkohol és a víz csökkenő koncentrációinak sorozatában. Az antigén visszanyerését úgy hajtottuk végre, hogy a metszeteket 40 percig pároltuk, majd 20 percig hűtöttük etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) oldattal ellátott sejtcímke-trilógiában. Az antigén visszanyerése után a metszeteket Tris-pufferolt oldattal inkubáltuk Tween-20-mal 5 percig, majd betöltöttük a Dako automatizált festőrendszerbe. Az EnVision rendszert (Dako) alkalmazták az elsődleges antitest vizualizálására hematoxilin ellenfestéssel.

A PAX8 antitest érzékenységét és specifitását különféle normál szövetekkel validálták, és csak a különálló magfestést tekintették pozitívnak a PAX8 szempontjából. A diffúz pozitív festést a PAX8-ra pozitívan festő tumorsejtek 50% -ának nevezik; egyébként a festést fokálisan pozitívnak tekintették. Metasztatikus RCC-k esetén azokat az eseteket tekintették pozitívnak, amelyeknél a PAX8 esetében a tumorsejtek festése> 5% volt. A tumorokban a PAX8 festés intenzitását gyengének (1+), mérsékeltnek (2+) és erősnek (3+) minősítették.

Eredmények

PAX8 expresszió normális felnőtt vesében, ureterekben és húgyhólyagban

PAX8 festést detektáltunk a proximális és disztális vese tubulusok hámsejtjeiben, a Henle hurkaiban, a gyűjtőcsatornákban és a Bowman-kapszula parietális hámsejtjeiben (1a. És b. Ábra). A festés mindig erősebb volt a disztális tubulusokban, a Bowman-kapszula parietális sejtjeiben és a gyűjtőcsatornákban (3+), mint a proximális tubulusokban (1+), amelyeknél nemspecifikus citoplazmatikus festődést is megfigyeltek. Erős PAX8 (3+) festést detektáltunk a bélelő urotheliális sejtek minden rétegében a vesepapillában és a vesemedence kezdeti részében. A disztális vesemedencében és az ureterekben a PAX8-pozitív sejtek fokozatosan az urothelium közbenső vagy bazális rétegeire korlátozódtak, csökkent festési intenzitással (2+) (1c-e ábra). A húgyhólyag urotheliumában nem volt PAX8 festés (1f. Ábra). A PAX8 festést nem detektálták a podocytákban, a mesangialis sejtekben, az endothel sejtekben, illetve a vese interstitium vagy nyirokerekében.

A PAX8 immunhisztokémiai festése normális felnőtt vesében. Immunreaktív PAX8-ot detektáltunk Bowmen-kapszula proximális tubulusaiban és parietális sejtjeiben ( nak nek, 200 ×), a disztális vesetubulus és a Henle-hurok sejtjeiben ( b, 200 ×), a gyűjtőcsatornában és a vesepapillákban ( c, 200 ×), a vesemedence urotheliuma ( d, 200 ×), az ureter urotéliuma ( és, 200 ×), de nem a húgyhólyag urotheliumában ( F, 200 ×).

Teljes méretű kép

PAX8 expresszió vese hámdaganatokban

Teljes méretű asztal

Példák a PAX8 immunhisztokémiai festésére vesehámdaganatokban. Immunreaktív PAX8-ot detektáltunk a tiszta sejt RCC-ben ( nak nek, Ő; b, PAX8; 200 ×), a CCR szarktoid komponense (rhbadoid) ( c, Ő; d, PAX8; 200 ×) és papilláris CRC ( és, Ő; F, PAX8; 200 ×).

Teljes méretű kép

Huszonegy primer papilláris RCC-t vontak be ebbe a vizsgálatba (18 férfi, 3 nő, 44 és 85 év közötti életkor, átlagéletkor 70 év), és a daganat mérete 2,2 és 11,7 cm között változott (átlagos méret 5,9 cm). Tizenhét eset volt az 1. típusú papilláris RCC az I. vagy a II. Stádiumban, és kilenc vagy nyolc beteg volt. Négy eset volt a 2. típusú papilláris CRC, amelyek II. Vagy III. A PAX8-at 19/21 (90%) papilláris RCC-ben detektálták, köztük 16 1. és 3. típusú 2. daganatot. A PAX8 festés diffúz és erős (3+) volt 15 esetben (2e. És f. Ábra) (14 1. típusú és 1. daganat). 1 típusú 2) és mérsékelt (2+) 4 esetben (2 1. típusú és 2. típusú 2. daganat). A PAX8 két negatív esete az 1. típusú tumorok egyikét és a 2. típusú egyiket tartalmazta.

Ebben a vizsgálatban 11 kromofób CRC volt (6 férfi, 5 nő, életkor-tartomány 28-75 év, átlagéletkor 58 év), és a daganatméretek 1 és 14 cm között voltak (átlagos tumorméret 4,9 cm). A daganatok hat betegnél I., négy betegnél II., Nyirokcsomó metasztázisúak voltak. A 11 (82%) kromofób CRC közül kilenc pozitívan diffúzan pozitív volt (3a és b ábra), négyben közepes intenzitású (2+), öt esetben pedig gyenge (1+).

Példák a PAX8 immunhisztokémiai festésére vesehámdaganatokban. Immunreaktív PAX8-ot detektáltak kromofób RCC-kben ( nak nek, Ő; b, PAX8; 200 ×), oncocytomákban ( c, Ő; d, PAX8; 200 ×) és medulláris vesekarcinómákban ( és, Ő; F, PAX8; 200 ×).

Teljes méretű kép

Ebben a vizsgálatban két medulláris vese carcinoma volt; az egyik egy 31 éves afro-amerikai férfi volt, sarlósejtes tulajdonságokkal, a másik pedig egy 34 éves nő, akinek korábban nem volt ismert sarlósejtes vonása/vérszegénysége. A daganatok 10, illetve 5 cm-esek voltak, és főleg a vese medullájában helyezkedtek el, a vese kéregjeinek, a vese medencéjének, az uretereknek és a kismedencei csomópontoknak, valamint a hilaris lágyrésznek a kiterjedt részvételével. Szövettanilag mindkét daganat rosszul differenciált neoplasztikus sejtekből állt lapokban, zsinórokban vagy fészkekben, magas fokú magjellemzőkkel, gyors mitotikus aktivitással és nekrózissal. Mindkét daganat diffúzan pozitív volt PAX8-ra mérsékelt festési intenzitással (2+) (3e. És f. Ábra).

Az elsődleges vesedaganatok vizsgálata 22 oncocytomát is tartalmazott (16 férfi, 6 nő, 43–80 éves korosztály, átlagéletkor 68 év), a daganatok pedig 1,5–10,7 cm (átlagos méret 4,8 cm) voltak. A 22 (95%) oncocytoma közül 21 diffúzan pozitív volt 15 esetben erős festéssel (3+) (3c) és 3 esetben mérsékelt (2+) 6 esetben. Az egyetlen PAX8-negatív oncocytoma egy 63 éves férfi 8 cm-es daganata volt, figyelemre méltatlan szövettani jellemzőkkel.

PAX8 expresszió a vesemedence, az ureter és a húgyhólyag urotheliális carcinomájában

A PAX8 expresszióját a felső és az alsó húgyutak urotheliális karcinómáiban is tanulmányozták, mivel ezekben a területekben normális urothelsejtekben expressziója eltér. Az esetek között a vesemedence 17, 2, illetve 40 urotheliális carcinoma volt, az ureter és a húgyhólyag. A nukleáris jellemzőket egy háromszintű rendszer osztályozta. A vesemedence 10, 6 és 1 urotheliális karcinómájának magjait 3, 2 és 1 kategóriába soroltuk. Az ureter két urothelialis carcinoma nukleáris fokozatú volt. A húgyhólyag 40 urotheliális carcinomájából huszonhét a 3. nukleáris fokozatba, a többi pedig a 2. nukleáris fokozatba sorolható. A PAX8 diffúz és közepesen erős (2+) festése volt. észlelték. a vesemedence 17 urothelialis karcinómájában 4-ben (∼ 23%) (4. ábra), köztük három esetben 2-es nukleáris fokozat és egy esetben 3-as nukleáris fokozatú PAX8-ot nem találtak az ureter vagy a Los 2 urothelialis karcinómájában. 40 húgyhólyag urothelialis carcinoma. Az eredményeket az 1. táblázat is összefoglalja.

Példák a PAX8 immunohisztokémiai festésére a vesemedence urotheliális karcinómáiban ( nak nek, Ő; b, PAX8; 200 ×).

Teljes méretű kép

A PAX8 expressziója metasztatikus RCC-kben

A 39 metasztatikus RCC közül 5 regionális nyirokcsomóban, 6 a tüdőben, 4 a májban, 7 a csontban vagy a lágyrészben, 5 az agyban, 5 a mellékvesében, 6 a hasnyálmirigyben és 1 a nyirokcsomóban volt. pajzsmirigy. Közülük 32 tiszta sejttípus, 3 papilláris, 2 rosszul differenciálódott, 1 rhabdoid jellegű volt, 1 pedig orsósejtkomponens volt. A PAX8-ot 39 metasztatikus RCC-ből 33-ban (85%) detektálták, 11-ben gyenge (1+), 17-ben mérsékelt (2+) és 5 esetben erős feszültség (3+). A tiszta sejttípusok közül öt és a rhabdoid tulajdonságokkal rendelkező tumor negatív volt a PAX8-ra. Az orsósejtes CRC gyengén pozitív volt a PAX8-ra, míg a két rosszul differenciált metasztatikus CRC mérsékelten pozitív volt. Az eredményeket a 2. táblázat foglalja össze. A tüdő, a máj, a mellékvesék vagy a hasnyálmirigy parenchymájában nem volt PAX8 festés. Néhány limfocita pozitívan festődött PAX8-ra; morfológiailag azonban megkülönböztetik az áttétes karcinómát és nem okoznak diagnosztikai nehézségeket.

Teljes méretű asztal

Vita

A PAX2-t a tiszta sejtes CRC-k 84-93% -ában, a papilláris CRC-k 85-100% -ában és az oncocytomák 87% -ában mutatták ki. 23, 24, 36 Itt megmutatjuk, hogy a tiszta sejtes RCC-k 98% -a, a papilláris RCC-k 90% -a és az oncocytomák 95% -a pozitív volt a PAX8-ra, a frekvenciák hasonlóak vagy jobbak, mint a PAX2-hez. Ebben a vizsgálatban a metasztatikus RCC-k 85% -ában is kimutatták a PAX8-at. Ezenkívül a PAX8-at kimutatták a kromofób CRC-k 82% -ában, a medulláris vese carcinomák 100% -ában és a CRC-k sarcomatoid komponensének 71% -ában, amelyek általában negatívak a PAX2, az aquaporin-1 és a CAIX szempontjából. Ez arra utal, hogy a PAX8 szélesebb diagnosztikai alkalmazással rendelkezik, mint ezek a markerek. Például a PAX8 kimutatása egy rosszul differenciált vese carcinomában segítene megállapítani egy ritka és magas fokú primer vesetumor, például medulláris vese vagy gyűjtőcsatorna karcinómák diagnózisát.