Rövid leírás

1 Biomedikai Tudományok Tanszék A HEPATITIS C PATOGÉN MECHANIZMUSAINAK ÉS KAPCSOLATÁNAK TANULMÁNYA.

ingyenes

Leírás

Orvostudományi Tanszék

A HEPATITIS C PATOGENIKUS MECHANIZMUSAINAK VIZSGÁLATA ÉS KAPCSOLATA A SZTEATOSZ FEJLESZTÉSÉVEL. FLAVONOIDOKKAL TÖRTÉNŐ ANTIOXIDÁNS KEZELÉS HATÁSA

Sandra Pisonero Vaquero, a biológia alapszakának beszámolója a León Leoni Egyetem doktori fokozatának megszerzéséhez, 2014

A DOKTORI IGAZGATÓK JELENTÉSE

Dr. María Victoria García Mediavilla és Dr. Sonia Sánchez Campos, a „A hepatitis C kórokozó mechanizmusainak és a steatosis kialakulásával való kapcsolatának vizsgálata” című doktori disszertáció igazgatói. A flavonoidokkal végzett antioxidáns kezelés hatása. ”- végezte Dña. Sandra Pisonero Vaquero a biomedicina doktori programban kedvezően jelentette betétjét, mivel megfelel a védekezéshez szükséges feltételeknek. Amit aláírnak, Leónban, 2014. január 1-jén. A doktori értekezés igazgatói, aláírva: Dra. Mª Victoria García Mediavilla Aláírva: Dra. Sonia Sánchez Campos

FELVÉTEL A DOKTORI TÉZIS FELDOLGOZÁSÁRA A biomedicina doktori programért felelős testület 2014. _____ napján tartott ülésén vállalta, hogy hozzájárulását adja a „A hepatitis kórokozó mechanizmusainak vizsgálata” című doktori disszertáció olvasási folyamatához C és kapcsolata a steatosis kialakulásával. Flavonoidokkal végzett antioxidáns kezelés hatása ”, dr. María Victoria García Mediavilla és Sonia Sánchez Campos, Sandra Pisonero Vaquero asszony készítette és angol nyelvű címe a következő: „A hepatitis C-hez társuló steatosis kialakulásában szerepet játszó mechanizmusok vizsgálata. flavonoidok ".

Amit aláírok, Leónban, 2014. ___. ______.

Aláírva: Dra. Mar Almar Galiana

Az Akadémiai Bizottság elnöke, aláírva: Dra. Mª Jesús Tuñón González

Az ebben a jelentésben bemutatott összes eredmény, valamint a doktori értekezés időszakából származó eredmények a következő publikációk tárgyát képezték: Az oxidatív/nitrozatív stressz által közvetített PI3K-LXRα-függő lipogenezis modulációja hozzájárul a hepatitis C gátlásához a vírus replikációja kvercetin által. Pisonero - Vaquero S, García - Mediavilla MV, Jorquera F, Majano PL, Benet M, Jover R, González ‐ Gallego J, Sánchez - Campos S. laboratóriumi vizsgálat 94 (3): 262-74, 2014, 2014 Az emberi máj zsíros a savmegkötő fehérje (FABP1) gént FOXA1 és PPARa aktiválja; és elnyomta a C/EBPα: Implikációk a FABP1-ben - szabályozás alkoholmentes zsírmájbetegségben. Guzmán C, Benet M, Pisonero - Vaquero S, Moya M, García - Mediavilla MV, Martínez - Chantar ML, González - Gallego J, Castell JV, Sánchez - Campos S, Jover R. Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipidek 1831 (4): 803-18, 2013 A máj X receptor α-mediált lipogenezis szabályozása mag és NS5A fehérjék által hozzájárul a HCV által kiváltott máj steatosishoz és a HCV replikációjához. García - Mediavilla MV, Pisonero - Vaquero S, Lima - Cabello E, Benedicto I, Majano PL, Jorquera F, González - Gallego J, Sánchez - Campos S. laboratóriumi vizsgálat 92 (8): 1191-202, 2012

Finanszírozás A doktori disszertáció befejezése során Sandra Pisonero Vaquero az Oktatási Minisztérium támogatásának kedvezményezettje volt az Országos Kutatási Humánerőforrás Képzési Program egyetemi tanárok képzésére (FPU, AP 20099-4484). a nemzeti K + F + I terv (2008–2011), amely tanárképzői és kutatói képzéshez vezet a statisztika keretein belül a képzésben részt vevő kutatószemélyzet számára, valamint az ilyen finanszírozás megszerzéséig a legutóbbi kutatási személyzet toborzásának finanszírozásához nyújtott támogatás Egyetemi diploma, a tudományos kutatás, fejlesztés, technológia és innováció 2007–2013 regionális stratégiája (Oktatási Minisztérium, Junta de Castilla y León) keretében, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával. Továbbá, ez a doktori értekezés része a projektnek: "Az LXRα nukleáris receptor és a fő lipogén és gyulladásos gének szerepe a steatosis kialakulásában és evolúciójában a hepatitis C in vitro modelljeiben. A quercetinnel végzett kezelés hatása". Az Oktatási és Tudományos Minisztérium Nemzeti K + F + I terve, Alapvető biológiai program. 2010–2012 (BFU2010-15784/BFI).

„Jutalmunk az erőfeszítés és nem az eredmény. A teljes erőfeszítés teljes győzelem ”Mahatma Gandhi

"Mekkora gazdagság, még szegény ember számára is, ha jó szülei vannak"

az egyetlen ember, akinek sikerült elérnie, hogy egy kicsit angolul beszéljek. És Sariii-nak, amiért elöntötte az irodát örömmel, hogy azok a kávéfőzők a napsütésben feltöltötték az elemeket, a lökdösődésért, amikor szükségem volt rájuk, olyan jó időre a laboratóriumon belül és kívül, valamint azért, hogy ilyen közel volt 9000 km-re. María José-nak, Ludy-nak, Héctornak és az IBIOMED és az Élettani Tanszék minden más emberének, hogy bármikor segítségükre lehetnek, amikor szükségem van rá; és főleg José Luis-nak, akitől egy szép napon hívást kaptam, és nem tudom, hogy jutott el hozzám, hogy ma egy doktori disszertáció elismerését írom. És természetesen szeretnék köszönetet mondani barátaimnak és főleg a családomnak a feltétel nélküli támogatásukért, a legnehezebb pillanatokban tanúsított biztatásukért, és azért, hogy mindig is nagyra értékeltem, amit nagyon csináltam. Köszönök mindent

Rövidítések és szimbólumok

ATP (adenozin-trifoszfát) -kötő kazetta

Kiegészítő dezoxiribonukleinsav

Szabad zsírsavak

Protein-kináz B

Alfa egérmáj 12

Az adenozin-monofoszfát által aktivált protein-kináz

Varianciateszt elemzése

Messenger ribonukleinsav

A 6. transzkripciós faktor aktiválása

A differenciálás klasztere 81

Szénhidrát-válasz elemkötő fehérje

Karnitin-palmitoil-transzferáz

Közvetlenül a vírusra ható szerek

Közvetlen ismétlés 4 nukleotid távtartóval

Az átlag standard hibája

Transzlációs iniciációs tényező eukariótákban

Enzimhez kapcsolt immunszorbens assay

Endoplazmatikus retikulumhoz kapcsolódó lebomlás

Reaktív nitrogénfajok

Reaktív oxigén fajok

Az endoplazmatikus retikulum stressz-válasz elemei

Zsírsav-szintáz

Zsírsavkötő fehérje

CD36 zsírsav transzlokáz

Zsírsav hordozó fehérje

Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hivatal

Farneseoid X receptor

Nagy sűrűségű lipoprotein

3-hidroxi-3-metil-glutaril-koenzim A-reduktáz

Hősokk-fehérje

Indukálható nitrogén-oxid szintáz

Az inzulin által kiváltott gén

A riboszómába való belépés belső helye

1. enzim, amely inozitolt igényel

Hosszú láncú acil-CoA dehidrogenáz

Alacsony sűrűségű lipoprotein

Máj X receptor

LXR válaszelem

Melanokortin receptor 4

Közepes láncú acil-CoA dehidrogenáz

Hiányos a metionin és a kolin

Rapamicin célpont emlős sejtekben

Mikroszomális triglicerid transzportfehérje

3‐ (4,5-dimetil-tiazol - 2-il) -2,5 - difenil-tetrazolium-bromid

Alkoholmentes zsírmájbetegség

Alkoholmentes steatohepatitis

Nukleáris faktor kappa B

Só-foszfát puffer

Polimeráz láncreakció

Endoplazmatikus retikulum protein kináz

PPAR koaktivátor 1

Foszfoinozit-3-kináz

Protein-kináz A

A peroxiszóma proliferátor által aktivált receptor

Mikro prekurzor RNS-ek

Elsődleges mikro-RNS-ek

Foszfatáz és tenzin homológ

Valós idejű kvantitatív PCR

RNS-indukált hangtompító komplex

Fordított transzkripció - valós idejű kvantitatív PCR

Tartós virológiai válasz

Retinoid X receptor

SREBP hasítási aktivátor fehérje

Nátrium-dodecil-szulfát

Kis RNS interferencia

B osztályú I. típusú hulladékgyűjtő

Szterol szabályozó elem

Szterol szabályozó elemet megkötő fehérje

Alfa tumor nekrózis faktor

A kibontakozott fehérjékre adott válasz elemei

Lefordítatlan régió

Hepatitis C vírus

HIV

Nagyon hosszú láncú acil-CoA dehidrogenáz

Nagyon alacsony sűrűségű lipoprotein

X-box-kötő fehérje 1

Tartalomjegyzék

Ábrák felsorolása. V Táblázatok listája. VII. BEVEZETÉS ÉS CÉLOK. 9 HÁTTÉR. 7 2.1. Hepatitis C. 9 2.1.1. Bevezetés. 9 2.1.2. Elterjedtség 10 2.1.3. Terjedés . 10 2.1.4. A hepatitis C vírus. 11 2.1.4.1. Genom. 11 2.1.4.2. A vírus bejutása. 13 2.1.4.3. Replikáció és fordítás. 14 2.1.4.4. Vírusos összeállítás és felszabadítás. 14 2.1.4.5. Genotípusok. 15 2.1.4.6. Rekombináció. 16 2.1.5. A betegség patogenezise. 16 2.1.5.1. A retikulum stressz és a kibontakozott fehérjékre adott válasz (UPR). 16 2.1.5.2. Autofágia 18 2.1.5.3. Apoptózis 19 2.1.5.4. Sejtciklus leállítás és a DNS károsodásának mitogén jelzése. Foszfoinozitol 3 kináz (PI3K) útvonal. 19 2.1.5.5. Mitokondriális diszfunkció. 20 2.1.5.6. Immunválasz és gyulladás. 21 2.1.5.7. Lipid anyagcsere. 22 2.1.5.8. A miRNS-ek szerepe. 24 2.1.6. A HCV fertőzés diagnózisa. 26 2.1.7. Kezelés . 27 2.1.8. A hepatitis C in vivo és in vitro vizsgálati modelljei 30 2.2. Steatosis 32 2.2.1. Bevezetés. 32 2.2.2 Patogenezis és hisztopatológia. 32 2.2.3. A lipid anyagcsere szabályozása. 34 2.2.3.1. De novo lipogenezis. 3. 4

22. ábra: A kvercetinnel vagy IFNa-val végzett kezelés hatása a szuperoxid-aniontermelésre és a lipidperoxidációra a HCV-G1 sejtekben. . 108 23. ábra. A quercetin vagy IFNα kezelés hatása az intracitoplazmatikus lipidfelhalmozódásra a HCV-G1 sejtekben. . 111 24. ábra. A quercetin vagy IFNα kezelés hatása a FAS expressziójára HCV-G1 sejtekben. . 112 25. ábra: A kvercetin vagy IFNa kezelés hatása az LXRα expresszióra HCV-G1 sejtekben. . 113 26. ábra: LXRα overexpresszió indukciója adenovirális fertőzéssel. . 115 27. ábra: A kvercetinnel vagy IFNa-val végzett kezelés hatása az LXRα túlzott expressziójára és a lipidek Hac7 Ad-0.5 sejtekben történő intracitoplazmatikus felhalmozódására. . 117 28. ábra: A quercetin vagy IFNα és LY294002 kezelés hatása a PI3K/AKT út által közvetített LXRα-függő lipogenezisre a HCV-G1 sejtekben. . 119

A táblázatok felsorolása 1. táblázat. A qPCR-ben a lipogén gének tanulmányozásához használt primerek és próbák. . 76 2. táblázat. A qPCR-ben használt primerek a HCV replikációjának vizsgálatához. . 77 3. táblázat: A ChIP-vizsgálathoz választott PCR-primerek. . 83.

BEVEZETÉS ÉS CÉLOK

Sandra Pisonero Vaquero 2.1.2. Prevalencia A hepatitis C vírus világszerte elterjedt, a világ bármely korában, nemében, fajában vagy régiójában élő embereket érint. Becslések szerint 130-170 millió ember, vagyis a világ népességének 2-3% -a fertőzött hepatitis C vírussal. A hepatitis C globális prevalenciáját az 1. ábra mutatja. Becslések szerint Ausztráliában körülbelül 400 000 krónikusan fertőzött van és Óceánia, Amerikában 14 millió, a Közel-Keleten 16 millió, Afrikában 28 millió és Ázsiában 83 millió (21). Körülbelül 9 millió ember fertőzött HCV-vel, a prevalencia a keleti és déli régiókban növekszik (23). Csak Spanyolországban a becslések szerint körülbelül 800 000 fertőzött ember van (24). Az afrikai populációban a HCV előfordulása országtól függően 0,1% és 17,5% között változik. A legelterjedtebb országok: Egyiptom (17,5%), Kamerun (13,8%) és Burundi (11,3%). A legkevésbé elterjedt országok közé tartozik Zambia (0,2%), Kenya (0,9%), Malawi (0,7%) és Dél-Afrika (0,1%) (25).