Tárgyak
Összegzés
Fő
A Spitz nevus szerzett melanocita elváltozás, amely általában gyermekeknél és serdülőknél alakul ki, bár felnőtteknél nem ritka. Klasszikusan úgy gondolják, hogy jóindulatú és konzervatív módon irányítják. Sophie Spitz 1948-as leírása óta 1 diagnózisa azonban aggodalomra ad okot, mert nem mindig lehet egyértelműen diagnosztizálni a Spitz nevus melanomát.
Bár egyes jellemzőket szisztematikusan kiértékelnek a Spitz nevi és a melanoma megkülönböztetésére, a különböző kritériumok relatív fontosságának meghatározása során a különböző szakértők eltérhetnek: méret, forma, a csatlakozási fészkek körülírása, az epidermiszben felfelé terjedés, a szubkután felé történő kiterjesztés, eozinofil gömbök, mitotikus alakok és azok felszínes vagy mély elhelyezkedése a tumorban, óriássejtek, fekély jelenléte és a stroma változásai. 2, 3, 4, 5 Ezenkívül a legtöbb elváltozás nem mutat sok olyan hagyományos kritériumot, amelyet általában a tumor szövettani diagnózisához használnak, ami hangsúlyozza az objektív kritériumok hiányát az elváltozások biológiai viselkedésének előrejelzéséhez. 3, 6, 7 Egyes esetek Spitz nevi 1 áttétekként történő besorolása jól illusztrálja, hogy egyes Spitz nevusokat csak szövettani szempontok alapján lehet pontosan megkülönböztetni a melanomától. Ezért az „atípusos Spitz-tumor” diagnosztikai kifejezést olyan elváltozások leírására használják, amelyek eltérnek a Spitz nevi tipikus megjelenésétől és biológiai jelentőségük bizonytalan. 7
Mivel az elváltozások egy részének diagnosztizálása továbbra is nehéz, ennek a tanulmánynak az volt a célja, hogy rutin immunhisztokémiai módszerekkel értékelje egy nagy jelölőpanel expresszióját, hogy rendelkezésre álljon egy általánosan elérhető fehérjegyüttes a Spitz nevus és a nevus. Összehasonlítottuk a fehérje expressziós aláírásokat mind a tipikus Spitz nevomák, mind a vertikális növekedési fázisú melanomák sorozatában annak érdekében, hogy olyan hatékony eszközt hozzunk létre, amely lehetővé teszi a melanocita elváltozások biológiai viselkedésének előrejelzését. Az eredmények kilenc, differenciálisan expresszált markert tartalmaznak a Spitz nevomákban és melanómákban, amelyek hasznosak mindkét melanocita elváltozás differenciáldiagnózisában.
Anyagok és metódusok
Szövetminták és szövetmátrixok felépítése
Összesen 90 paraffinba helyezett és formalinnal rögzített mintát vizsgáltak a madridi Universitario 12 de Octubre kórház 1995 és 2005 között összegyűjtött archívumából. Huszonnyolc megfelelt a tipikus Spitz neveknek, összhangban a Az orsó- és/vagy epithelioid melanocitafészkek jellemzői, a 3. és 62. méretű nem spitzoid melanómák primer vertikális növekedési fázisban. A vertikális növekedési fázist előre meghatározott kritériumok szerint határoztuk meg: 8 az epidermisz összes daganatos fészke kisebb, mint legalább egy a dermiszben, a dermális tumorsejtek jelenléte 25 vagy annál több sejtet tartalmaz, és az aktivitás mitotikus az intradermális neoplasztikus sejtekben . A melanomában szenvedő betegeket standard kritériumok szerint kezelték: műtéti reszekció megfelelő margókkal. Adjuváns interferont vagy kemoterápiás terápiát alkalmaztak metasztatikus betegség esetén, ha klinikailag javallt.
A reprezentatív hematoxilin-eozinnal festett szakaszokat kiértékeltük a szerzők szövettani jellemzői alapján, és a blokkokat megfelelő szövet (legalább 1 mm vastag) 9 alapján választottuk ki a szövetmátrixok elkészítéséhez.
A Spitz nevi-t és még kettőt VGP-melanómákkal tartalmazó szöveti mikroarray-t összeállítottuk a fent leírtak szerint, 9 beleértve az elsődleges paraffin-blokkok erősen sejtes területeinek legalább két 1,5 mm átmérőjű öntvényét. Ezenkívül normál szöveteket (főleg reaktív nyirokcsomókat, mandulákat és bőrt) helyeztek a tömbökre belső kontrollként.
Immunhisztokémiai rendszer és pontozás.
Az immunhisztokémiai festést 3 µm-es szövetszelvényeken hajtottuk végre a szöveti mikroelektromos blokkokból, 22 különböző primer antitest felhasználásával biológiailag releváns fehérjék ellen (forrás és koncentráció az 1. táblázatban felsorolva). Az immundetektálást LSAB vagy Envision vizualizációs rendszerrel végeztük (mindkettő Dakocytomation cégtől, Glostrup, Dánia), diaminobenzidin-kromogént használva szubsztrátként. Valamennyi szakaszt ellenárammal festettük hematoxilinnel (DAKO).
Teljes méretű asztal
Negatív kontrollokat kaptunk az elsődleges antitest kihagyásával. Az antitestek küszöbszelekcióját és belső kontrollját korábban meghatároztuk, hogy megkönnyítsük a módszer reprodukálhatóságát a publikált irodalom szerint 9 (lásd 1. táblázat). Az összes esetet két patológus függetlenül értékelte, és pozitívként rögzítették, figyelembe véve a fehérje expresszióját a neoplasztikus sejtekben és az egyes markerek specifikus vágását. A pozitív sejtek százalékos arányának esetleges eltéréseit a metszetek egyidejű újraértékelésével oldották meg.
Statisztikai elemzés
Fisher pontos tesztjét használták annak felmérésére, hogy egy adott fehérje expresszió társult-e egy adott elváltozással, legyen az Spitz nevus vagy melanoma. A többszörös tesztek hatásának elkerülése érdekében statisztikai szignifikanciát vontunk le a p 10 értékekre. A klinikai és hisztopatológiai adatokat az összes statisztikai vizsgálat elvégzése után állítottuk össze (2. táblázat).
Teljes méretű asztal
Eredmények
Klinikai és hisztopatológiai jellemzők.
A sorozat 90 betegből áll (52% nő és 48% férfi) 3 és 91 év között. A Spitz nevi és a melanoma betegek átlagéletkora 21,6, illetve 62 év volt. Az elváltozások helye 90 esetből 71-ben volt ismert (79%), ez volt a leggyakoribb végtag a Spitz nevi esetében (46%), a törzs pedig a melanomák esetében (31%). A Spitz nevi betegek mindegyike életben volt metasztázis nélkül, míg a vertikálisan növekvő melanomák 56% -ában (62-ből 35) metasztázis alakult ki, és 34% -uk (62-ből 21) meghalt.
A Spitz nevi legtöbb esetben epithelioid vagy orsó melanociták mutatkoztak jelentős citológiai atypia nélkül (1. ábra). A Spitz nevi 28 esetének egyikében sem mitotikus alakokat, sem pagetoid kiterjesztést nem figyeltek meg. A melanomák szövettani vizsgálata (2. ábra) kimutatta, hogy az Egészségügyi Világszervezet melanomára vonatkozó osztályozása szerint a melanoma leggyakoribb altípusa a felületes terjedésű melanoma volt (62 esetből 29, 47%). A 62 melanoma eset közül huszonegy (34%) fekélyesedett, és 69% (62 esetből 43) Breslow-indexe> 1 mm volt. Legtöbbjük áttétet mutatott diagnózis esetén (62 esetből 35, 56%). A 2. táblázat összefoglalja e sorozat klinikai és hisztopatológiai adatait.
Két henger tipikus Spitz nevi (H&E; eredeti nagyítás: × 100 ( nak nek, b ) és × 400 ( c, d )).
Teljes méretű kép
Két henger VGP primer melanomája (H&E; eredeti nagyítás: × 100 ( nak nek, b ) és × 400 ( c, d )).
Teljes méretű kép
Kifejezési profil Spitz Nevi és Melanoma esetén
A Spitz nevi és a melanoma fehérje expressziójának eredményeit a 3. és 4. táblázat részletezi, és a 3. ábra szemlélteti. A specifikus melanocita markerek immunfestése minden esetben az S-100 pozitivitását mutatta, a melan -A expressziója a Spitz nevi legtöbb esetben (96 %) és melanómák (92%), míg a HMB-45 csak 44% -ban expresszálódott, a Spitz nevi 27 esetéből 12 esetben a melanoma esetek 95% -ához (62 közül 59).
Teljes méretű asztal
Teljes méretű asztal
Reprezentatív immunhisztokémiai festés VGP melanomákban és Spitz nevi-ben jelentős fehérjék, köztük p21 ( nak nek - d ), survivin ( és - h ) és caveolin ( én - l ) (eredeti nagyítás: × 100 és × 400).
Teljes méretű kép
A sejtciklus-szabályozókat tekintve a D1 ciklin magas expressziót mutatott a Spitz nevi-ben (17/23, 74%), és szignifikánsan csökkent a primer vertikális növekedési fázisú melanómákban (10/61, 16%). Nem találtak szignifikáns változást a p16, a p53 vagy az Rb-ben, míg a legtöbb Spitz-daganatban (91%, 23-ból 21-ben) a p21 esetében szignifikánsan magasabb nukleáris pozitivitás volt megfigyelhető a rosszindulatú daganatokhoz képest, amelyekben a p21 csak 27% -ban expresszálódott ( Esetek 17/62) (3. ábra).
A proliferatív aktivitást Ki-67 és topoizomeráz II α immunfestékkel értékeltük. A Spitz nevi szignifikánsan alacsonyabb Ki-67 és topoizomeráz α arányt mutatott, mivel nagyon kevés pozitív sejtfolt volt (11-en mutattak jelentős túlzott expressziót a Spitz nevi-ben (25-ből 26, 96%). Mindkét marker), szemben a melanomákkal (23-ból 23 53, 43%, illetve 54, 54, 48%).
Vita
Nemrégiben úgy tűnik, hogy az összehasonlító genomi hibridizáció és a fluoreszcens in situ hibridizáció a léziós szövetekben hasznos kiegészítő technikát jelentenek a spitzoid melanocita neoplazmák (16, 17, 18, 19, 20, 21) nehéz eseteiben, bár ezek a nagy felbontású molekuláris technikák még nem Széles körben elérhetőek, és néha nehezen értelmezhetők. Ezért további vizsgálatokra van szükség ezen technikák diagnosztikai eszközként történő értékeléséhez. A hisztopatológiai vizsgálat továbbra is arany standard a Spitz nevi és a melanóma megkülönböztetésében, bár nincsenek objektív kritériumok egy adott elváltozás biológiai viselkedésének előrejelzésére. Korábban számos, többnyire egyetlen vagy kevés fehérje expresszióján alapuló tanulmány megpróbálta megvilágítani az 5., 15., 22., 23. spitzoid elváltozás körüli évelő vitát, de egyelőre nem ismert olyan marker, amely megbízhatóan megkülönböztetné a két neoplazmát. Ezért sem a HMB-45, az AgNOR, a ciklin D1, a c-myc, a c-fos, a telomeráz, a cdc-7, az anti-leptin receptor, a BCL-2, a p53 és a p16 sem bizonyult hasznosnak a Spitz nevi és a melanoma megkülönböztetésében. . 13., 24., 25., 26., 27., 28., 29., 30., 31., 32., 33.
Ebben a tanulmányban a fehérje expressziójának összehasonlító elemzését végeztük a klasszikus Spitz nevi és a vertikális növekedési fázisú melanomák közötti széles antitestpanelen. A nagy mennyiségű melanocita daganat különböző markereinek kiértékelését lehetővé tevő, nagy áteresztőképességű szöveti mikro-sugarak elemzésével azonosítottunk egy specifikus fehérje expressziós profilt, amely megkülönbözteti a tipikus Spitz nevust és a nem spitzoid melanomát (2. táblázat).
A melanomával ellentétben a Spitz nevi-ben megfigyelt ciklin D1 túlzott expresszió nem tűnik összefüggésben a sejtek proliferációjával. Ezért, amint azt korábban megjegyeztük, a Ki-67, a sejtciklushoz társuló nukleáris antigén, a nukleáris survivin, egy mitotikus szabályozó, amely megőrzi a 38 mikrotubulusok és a topoizomeráz II α stabilitását, kizárólag a daganatok és a normál szövetek szaporodó rekeszeiben expresszálódik, 39 a melanoma vs nevus jelentős növekedése. 8, 40, 41, 42, 43 Bár a melanómák magasabb proliferációs rátát mutatnak (Spitz neviben 37% és 0%), ha Ki-67-vel értékeljük, a Spitz nevi néhány esetben szétszórt pozitív sejteket mutat a felső elváltozás részben, míg a melanómában nukleáris az egész elváltozás címkézése. 41, 42
A strukturális állványfehérje-caveolin, amelynek további szerepe van a plazmamembrán szignáltranszdukciójában, a vertikális növekedési fázisú melanomákban expresszióvesztést mutatott a nevusokhoz képest. Ezek az eredmények összhangban vannak a korábbi jelentésekkel 9, és alátámasztják expressziójuk és a caveolae képződésének csökkentését onkogén transzformált sejtekben. 44.
Ezenkívül a vizsgálatunkban szereplő egyes fehérje markerekről korábban kimutatták, hogy részt vesznek a sejt-mátrix kölcsönhatások közvetítésében, és szerepet játszanak a melanoma inváziójában és progressziójában. 11 Ez a tanulmány továbbá a szerin/treonin kináz PKC α, valamint a savas és ciszteinben gazdag fehérje oszteonektin/SPARC magas expresszióját tárja fel Spitz nevi-ben (mindkét fehérje esetében 96%), és statisztikailag szignifikáns különbséget mutat a melanomákhoz képest (48 és 43%). p; 11, 45. Ezek a megfigyelések elsősorban arra utalnak, hogy a mély dermális invázió nem feltétlenül áll összefüggésben a rosszindulatú daganattal, és két új markert azonosítanak, amelyekkel meg lehet különböztetni a melanomákat a Spitz nevitől.
Ezeknek a megállapításoknak önmagában egyik sem elegendő a melanoma diagnózisának kizárásához, de úgy tűnik, hogy egy fehérje expressziós panel kombinációja, amely magában foglalja a ciklint D1, p21, oszteonektint (SPARC), PKC α, Ki-67, topoII α és survivint nagy diagnosztikai haszna lehet a tipikus Spitz nevus megkülönböztetésében rosszindulatú utánzóitól. A Spitz nevi-ben és a melanómákban megfigyelt, szignifikánsan eltérő expresszió egyes fehérjék esetében többszörös marker expressziós panel használatát jelzi a differenciáldiagnózisban (3. táblázat). Különösen a ciklin D1, p21, oszteonektin (SPARC) és PKC a magasabb expressziója, valamint a Ki-67, a topoII α és a survivin alacsonyabb expressziója szorosan összefügg a jóindulatú viselkedéssel.
Összefoglalva, megmutattuk annak lehetőségét, hogy egy rutin technika, például az immunhisztokémia segíthet megkülönböztetni a Spitz nevust a melanomától. Ugyanakkor az atipikus Spitz-daganatokkal, a Spitz nevi tipikus megjelenésétől eltérő és bizonytalan biológiai viselkedéssel 7 rendelkező elváltozások, hosszú távú nyomon követéssel, valamint a spitzoid melanómák kötelezőnek tűnnek egy hasznos és értékes marker expresszió a melanocita elváltozások osztályozásában.