Tárgyak

Összegzés

Bevezetés

A madárinfluenza egyedülálló modellt kínál az embrióba juttatott zsírsavak készletének specifikus manipulálására és a kikelés (azaz születés) után a zsírszövet lerakódására gyakorolt ​​hatás tesztelésére. A tojássárgája a zsírsavak nagy részét az embrióban fejlődő szövetekhez juttatja, a kikelés után egy-két napig, amíg az etetés meg nem valósul. A sárgája zsírsavprofilja módosítható az étkezési zsír forrásán keresztül, amelyet a tyúknak juttatnak 22, 23. Például az EPA-val és DHA-val dúsított kereskedelmi tojásokat úgy állítják elő, hogy a tyúk étrendjét tengeri olajokkal egészítik ki. Ezt az összefüggést használjuk annak a hipotézisnek a tesztelésére, hogy az embrió dúsítása az EPA-ban és a DHA-ban, amelyet halolajban (FO) szállítanak, csökkenti a zsírszövet lerakódását a csibékben. A kukoricaolajat (CO) referenciaként használtuk, mivel összehasonlítható mennyiségű PUFA-t (

60%), de főleg az n-6 családé. Az összes csirkét kikelés után CO-alapú táplálékkal etették, hogy a kísérleti kezelést az embrionális fejlődési időszakra korlátozzák. Megmutattuk, hogy az anyai táplálás FO-val a kikelés után jelentősen csökkentette az adipozitást, a növekedésre nincs hatással. Eredményeink arra utalnak, hogy az anyai étrendben lévő zsírsavak hozzájárulnak a zsírszövet fejlődésének programozásához.

Eredmények

Tojástermelés és a csirke szövet zsírsavösszetétele.

A tyúktápláléknak a tojás minőségére gyakorolt ​​hatásának értékelésére a kikelés, a tojás súlya és a csirke kelési súlyát használtuk, ezek egyike sem különbözött szignifikánsan a CO és FO tyúktojások között (P> 0,05). Az agyban és a májban található foszfolipidek zsírsav-összetételeit profilizáltuk és minőségileg összehasonlítottuk, hogy megerősítsük, hogy az EPA és a DHA a kikeléskor az FO csirkék szöveteiben gazdagabb volt, mint a CO csirkéké. Az agyat és a májat a keltetéskor alkalmazott relatív tömegük miatt használták. Az EPA-t és DHA-t tartalmazó foszfatidilkolin (PC) fajok dúsítási szintjeit az 1. táblázat mutatja. A növekedés (FO/CO)

1,2 (18: 0/22: 6 az agyban) és

130,4 (PC 18: 4)./22: 6 májban), több mint kétszer dúsítva a legtöbb faj számára. Ezek az adatok megerősítik, hogy az anyai étrend zsírsavprofilja a keltetéskor a kapott fiókák zsírsavösszetételében megmutatkozott.

Teljes méretű asztal

Az anyai zsírsavak hatását a fejlődő zsírszövet zsírsavösszetételére GC-FID alkalmazásával számszerűsítettük. A hasi zsírszövet teljes lipidfrakciójának zsírsavösszetételét 7 és 14 napos korban elemeztük (2. táblázat). Öt zsírsav (palmitoleinsav, γ-linolén-, eikozén-, eikozadien- és dokozadiénsav) szövetbősége az életkor előrehaladtával nőtt (P kor 0,05). Mindkét lerakódás relatív súlya azonban jelentősen csökkent a FO csirkéknél vs. CO (P

anyai

Az adipociták mennyisége és száma CO és FO csirkékben 7 és 14 napos korban. A CO hasi zsírszövetének reprezentatív H&E festett képei ( NAK NEK, B ) és FO ( C, D ) az adipociták térfogatának meghatározásához 7 ( NAK NEK, C ) és 14. ( B, D ) d. Méretarány = 40 μm. A tárgylemezenként két tárgylemezt és három egymástól független mezőt számláltunk három fiókában, minden életkor/diéta csoportban. ( ÉS ) Adipociták átlagos térfogata (μm 3 × 104), ± SD; ( F ) az adipociták átlagos száma (X 106), ± SD. A diéta, az életkor és kölcsönhatásuk (étrend x életkor) fő hatásait az adipociták mennyiségére és számára az ANOVA határozta meg. Jelentős F tesztek (P

A csirkék CO és FO adipocita területének (μm 2) frekvenciaeloszlása ​​7-nél ( NAK NEK ) és 14. ( B ) d öreg. Az adipocita területeket a H&E festett képek alapján mértük, és méretük szerint konténerekre osztottuk. Az egyes tálcákon lévő sejtek átlagos frekvenciáját, ± SD, a T-teszt mutatja és hasonlítja össze. * Eltér a CO-tól, a P # különbözik a CO-tól, P 0,05) A máj a baromfi de novo lipogenezisének fő helyszíne (mint az embereknél) 24, és fontos szerepet játszik a brojlereknél a zsírlerakódásban 25. Az étrend nem befolyásolta szignifikánsan a CPT1, ACOX1 és FASN expresszióját a májban (3C. Ábra), összhangban az FO és CO csirkék máj trigliceridjeinek hasonló tartalmával (az adatokat nem mutatjuk be).

16-szor) a zsírszövet FO-jában a CO-val szemben, proteomikai adataink szerint. Ez az enzim egy koordinált DNS-demetiláz rendszer része, amely epigenetikus módosítással szabályozza a fejlődő embrióban a sejtek sorsát 46. Az APOBEC2 expressziója főleg a vázizomhoz kapcsolódik, amelyben a myoblast differenciálódásához kapcsolódik, de csirkék zsírszövetében is kifejeződik. Ha az anya FO-val történő etetése epigenetikus mechanizmusok révén csökkentette az adipozitást, amelyek gyakran stabilak, fontos következményei vannak a gyermekkori (és potenciálisan felnőtt) elhízás ellenőrzésének új eszközeivel. Utóvizsgálatokra van szükség az anya FO-val történő etetésének metilációs mintáinak és egyéb epigenomikus jegyeinek jellemzéséhez ennek a lehetőségnek a feltárása érdekében.

Összefoglalva, adataink azt mutatják, hogy az anya halolaj-fogyasztása csökkenti a zsírlerakódást az utódokban. Vizsgálatunk az élet első két hetére korlátozódott, és utólagos kísérletek szükségesek annak megállapításához, hogy ez a hatás meddig fennmarad a csibék érésével. Ezek az eredmények kiegészítik a legutóbbi emberen végzett vizsgálatokat, amelyek összekapcsolják az LCFA PU-n-3-at az anyai étrendben a gyermekek zsírtömegének csökkenésével. Következésképpen kiemelik a zsír felhalmozódásának csillapításának lehetőségét és a gyermekkori elhízás kockázatát a születés előtti étrendi beavatkozás révén.

Mód

Fogyókúrák és állatállomány

Vér és szövetek gyűjtése.

A fiókákat CO 2 fulladással eutanizálták. Minden csoportból két fiókát eutanizáltak a kikeléskor a máj- és agyszedéshez lipidanalízishez. Az egyes szövetek mintáit gyorsan fagyasztottuk és -80 ° C-on tároltuk. A fennmaradó csibéket 7 és 14 napos korban eutanizálták. Az eutanázia idején a vért szív vénapunkcióval vettük fel, és 10 ml-es szérum-elválasztó csövekbe helyeztük (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). A szérumot centrifugálással elválasztottuk és -80 ° C-on tároltuk a keringő metabolitok elemzéséig. A hasi és femorális (szubkután) zsírszövet-lerakódásokat boncoltuk, és adipozitási indexként mértük. Az egyes tartályokból és a májból származó mintákat gyorsfagyasztva folyékony nitrogénben tároltuk -80 ° C-on. A hasi zsírszövet mintákat 24 órán át 4 ° C-on paraformaldehidben (4%) rögzítettük az adipociták méretének meghatározásához. szövettan.

A szérum metabolitjai

Kereskedelemben kapható kolorimetriás tesztkészleteket használtunk a szérum glükózszint (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) és a nem észterezett zsírsavak (NEFA) (Wako Chemicals, Neuss, Németország) mérésére.

Zsírsav-elemzés

Foszfolipid elemzés

Adipocita mérete

Étrendenként három madár hasi zsírmintáját mindkét életkorban bevontuk, metszettük és hematoxilinnal és eozinnal (H&E; két tárgylemez/madár) festettük az adipocita méretének meghatározását a fent leírtak szerint. Azt a három madarat alkalmaztuk, amelyek zsírtartalma az egyes táplálék/korcsoportok átlagához legközelebb esett. Röviden, három független mező képét rögzítettük tárgylemezenként, minden egyes dián 20-szoros nagyítással, az Advanced Microscopy Group EVOS XL magmikroszkóppal (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). A konzisztencia érdekében ugyanaz a személy végzett minden mérést. A J képet (1.48 verzió, National Institutes of Health) használtuk az adipociták területének (μm 2) meghatározására, 2,8 μm/pixel mikroszkóp beállításokkal, és arra a korlátozásra, hogy a méréseknek meghaladják az 500 μm kettőt. A frekvenciaeloszlásokat úgy állították elő, hogy az adipocitákat tartályokba csoportosították a terület alapján, és megszámolták az egyes konténerek sejtjeinek gyakoriságát. Az adipocita térfogatának és a 68. számának kiszámításához standard módszert alkalmaztunk .

Valós idejű PCR-vizsgálat

Körülbelül 200 mg hasi zsírszövetből és öt csibéből származó májból izoláltuk az összes RNS-t minden diétacsoportban 14 napon belül, Invitrogen ™ TRIzol ™ (Invitrogen, Carlsbad, CA) alkalmazásával. Az öt olyan madarat alkalmaztuk, amelyek zsírtartalma a legközelebb állt az egyes táplálékok átlagos zsírtartalmához. CDNA-t szintetizáltunk 500 ng teljes RNS-ből 20 µl reakcióban az iScript cDNS szintézis készlet segítségével (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). A kvantitatív valós idejű PCR-hez (QPCR) előre definiált és validált primereket vásároltunk a Qiagen-től (Quantitect; Germantown, MD). A QPCR-t három példányban végeztük minden mintán, az iQ SYBR Green Master Master Mix (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) alkalmazásával, a korábban leírtak szerint 53. A kérdéses gének expressziós szintjét normalizálták a házvezetőként használt TBC1 doméncsalád (8. tag) (TBC1D8) expressziójához.

Proteomika

Statisztikai elemzés

A statisztikai elemzéseket SAS (V 9.4) alkalmazásával végeztük. Az adatok normalitását Shapiro-Wilks alkalmazásával ellenőriztük a statisztikai tesztelés előtt. A test és a zsír súlyát, a szérum metabolitokat, a zsírsav szöveti összetételt, az adipociták átlagos méretét és az adipociták számát ANOVA vegyes modell alkalmazásával elemeztük az étrend, az életkor és kölcsönhatásuk (a diéta X. életkora) kifejezéssel. Jelentős F-tesztek (P 74 az adatok eloszlásának normalizálására. Különböző mennyiségű fehérjék funkcionális elemzését az Annotation, Visualization and Integrated Discovery adatbázisban található Functional Annotation and Pathway Mapping opciókkal végeztük (DAVID, V 6.8) 75. Minden statisztikai teszt statisztikai szignifikancia kritériumaként P-értékeket ≤ 0,05 alkalmaztunk.

Az adatok elérhetősége

A jelenlegi vizsgálat során létrehozott adatkészletek ésszerű kérésre a megfelelő szerzőtől elérhetőek

Változtassa meg a történetet

A hála kifejezése

Ezt a munkát a BHV támogatásával támogatta az Állattenyésztési Betegségek és Emberi Egészség Kiválósági Központja, a Tennessee Egyetem Állatorvostudományi Főiskolája és az AgResearch, a Tennessee Egyetem Mezőgazdasági Intézete. A szerzők köszönetet mondanak az Iowa Állami Egyetem WM Keck Metabolomikai Kutatólaboratóriumának a zsírsav-elemzésekért, és köszönetet mondanak Dr. Michael O. Smith-nek és Dr. Jay Whelannak a projektben való részvételükért.

Elektronikus kiegészítő anyag.

Kiegészítő információk és adatok

Hozzászólások

Megjegyzés benyújtásával vállalja, hogy betartja a Közösségi Feltételeinket. Ha valami visszaélést tapasztal, vagy nem felel meg feltételeinknek vagy irányelveinknek, kérjük, jelölje meg nem megfelelőnek.