Figyelem: Ez az oldal az oldal eredeti fordítása angolul. Ne feledje, hogy mivel a fordításokat géppel generálják, ne azt, hogy minden fordítás tökéletes lesz. Ezt a weboldalt és oldalait angol nyelven kívánják olvasni. Ennek a weboldalnak és weboldalainak bármilyen fordítása részben vagy egészben pontatlan és pontatlan lehet. Ez a fordítás kényelmi szolgáltatásként szolgál.
Az ioncserélő kromatográfia (IEX) egy olyan technika, amelyet általában használnak a biomolekulák tisztításához. Ez magában foglalja a molekulák szétválasztását a töltésük alapján.
Ez a technika kihasználja a kölcsönös hatást a mintában lévő töltött molekulák és a kromatográfiás mátrix papírfázisában lévő ellentétesen töltött részek között. Ez a fajta elválasztás más technikákkal nehéz, mivel a terhelést az alkalmazott puffer pH-ja könnyen befolyásolja.
Kétféle ioncsere-elválasztás lehetséges - kationcsere és anioncsere. Az anioncserében az állófázis - míg a kationcserében negatív - pozitív töltésű.
Az ioncserélő kromatográfia elve
Az IEX-kromatográfiát használjuk a töltött biomolekulák elválasztására. A töltött molekulákat tartalmazó nyers mintát folyékony fázisként használják. A kromatográfiás oszlopon áthaladva a molekulák az állófázisban ellentétesen töltött helyekhez kötődnek.
Az elválasztott molekulákat töltésük alapján változó ionerősségű oldattal öblítik ki. Egy ilyen oldatot áthaladva az oszlopon, a molekulák szelektív elválasztása történik különféle töltésük szerint.
A technika
Az ioncserélő kromatográfia legfontosabb lépéseit az alábbiakban soroljuk fel:
- A fehérje nem tiszta mintáját meghatározott pH-n töltjük az ioncserélő kromatográfiás oszlopra.
- A töltött fehérjék a gyantán töltött ellentétes funkcionális csoportokhoz kötődnek
- Sógradiens alkalmazható az elválasztott fehérjék öblítésére. Alacsony sótartalom esetén a kevés töltésű csoportot tartalmazó fehérjéket öblítik ki, nagyobb sókoncentrációk esetén a több töltésű csoportot tartalmazó fehérjéket öblítik ki.
- Az oszlop mosásával eltávolítják a nem kívánt fehérjéket és szennyeződéseket.
PH-gradiens alkalmazható az egyes fehérjék öblítésére is izoelektromos pontjuk (pl) alapján, amely ponton a fehérje aminosavai semleges töltést hordoznak, és ezért nem vándorolnak elektromos mezőben. Mivel az aminosavak a zwitter ionos összetételei, pozitív és negatív töltésű csoportokat tartalmaznak. A környezet pH-ja szerint a fehérjék pozitív, negatív vagy semmilyen töltést nem hordoznak. Izoelektromos pontjukon nem lépnek kölcsönhatásba az oszlopgyanta töltött feleivel, ezért nem öblítik ki őket. Csökkenő pH-gradiens használható a fehérjék öblítésére anioncserélő gyanta felhasználásával, és növekvő pH-gradiens használható a fehérjék öblítésére kationcserélő gyantákból. Ennek oka, hogy a mozgatható fázis puffer-pH-értékének növelésével a fehérje kevésbé protonálódik (kevésbé pozitív töltésű), így nem képezhet ionos kölcsönhatást egy negatív töltésű gyantával, lehetővé téve az eluálását. Ezzel szemben a mozgatható fázis pH-értékének csökkentésével a molekula protonálódik (kevésbé negatív töltésű, lehetővé téve az eluálását).
A gyanta kiválasztása ioncserélő kromatográfiával
Az ioncserélő gyanták pozitív vagy negatív - kovalensen töltött funkciós csoportokkal rendelkeznek, amelyek szilárd mátrixhoz kapcsolódnak. A mátrixok általában cellulózból, polisztirolból, agarózból és poliakrilamidból készülnek. Néhány tényező, amely befolyásolja a gyanta megválasztását, a kation vagy anioncserélő, fluxus, gyenge vagy erős ioncserélő, a gyanta részecskemérete és a kötőkapacitás. A kérdéses fehérje stabilitása diktálja az anion- vagy kationcserélő kiválasztását - bármilyen cserélő használható, ha a stabilitás nem érdekel.
Az ioncserélő kromatográfia felhasználása
Az ioncsere a legelterjedtebb kromatográfiai módszer a töltött biomolekulák, például polipeptidek, fehérjék, polinukleotidok és nukleinsavak szétválasztására és tisztítására. Szétszórt alkalmazhatósága, nagy kapacitása és egyszerűsége, valamint nagy felbontása a szétválasztási módszer sikereinek legfontosabb okai. Az ioncserélő kromatográfiát széles körben használják különféle ipari alkalmazásokban, amelyek némelyike a következő:
- Vérkomponensek, például albumin, rekombináns növekedési faktorok és enzimek szétválasztása és tisztítása.
- Biotechnológia - analitikai felhasználások, például minőség-ellenőrzés és működési folyamat-ellenőrzés
- Élelmiszer- és klinikai kutatások - a búzafajták és a proteinuria korrelációjának vizsgálata különféle vesebetegségekkel.
- Fermentáció - kationcserélő gyantákat használnak a fermentációs folyamat nyomon követésére a ß-galaktozidáz előállítása során.
Hivatkozások
További irodalom
Susha cheriyedath
Susha az indiai Calicuti Egyetemen szerzett tudományos fokozatot (kémia) és biokémiai diplomát (M.Sc). Mindig élénken érdekelte az orvostudomány és az egészségtudomány. Mesterképzésének részeként biokémiai szakterületre helyezte a hangsúlyt, különös tekintettel a mikrobiológiára, az élettanra, a biotechnológiára és a táplálkozásra. Szabadidejében imád vihart főzni a konyhában szuper rendetlen sütési kísérleteivel.
Idézetek
Kérjük, használja a következő formátumok egyikét, hogy idézze ezt a cikket esszéjében, dolgozatában vagy jelentésében:
Cheriyedath, Susha. (2018. augusztus 23.). Hogyan működik az ioncserélő kromatográfia? News-Medical. Letöltve 2021. január 11-én a https://www.news-medical.net/life-sciences/How-Does-Ion-Exchange-Chromatography-Work.aspx webhelyről.
Cheriyedath, Susha. Msgstr "Hogyan működik az ioncserélő kromatográfia?" News-Medical. 2021. január 11. .
Cheriyedath, Susha. Msgstr "Hogyan működik az ioncserélő kromatográfia?" News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/How-Does-Ion-Exchange-Chromatography-Work.aspx. (elérhető: 2021. január 11.).
Cheriyedath, Susha. 2018. Hogyan működik az ioncserés kromatográfia? News-Medical, megtekintve 2021. január 7-én, https://www.news-medical.net/life-sciences/How-Does-Ion-Exchange-Chromatography-Work.aspx.
A News-Medical.Net ezt az orvosi információs szolgáltatást a jelen feltételeknek megfelelően nyújtja. Felhívjuk figyelmét, hogy az ezen a weboldalon található orvosi információk célja a beteg és az orvos/orvos közötti kapcsolat és az általuk nyújtott orvosi tanácsadás támogatása, nem pedig annak helyettesítése.
News-Medical.net - AZoNetwork webhely