UniversidaddeExtremadura TTK ofBiomedical Sciences Area ofMicrobiology DISSZERTÁCIÓS azonosítása és funkcionális gének vizsgálata dischargingomycescerevisiarevised részt phosphorylationdenoligosaccharides Bemutatta paraoptaralDegree ofDoctorby: IsaacCorbachoCuello Badajozni, 25thAdvancedProgramme ofNaturalism és BiologyCorbachoCorbachoCuello Badajoz, 25thAdvancedNovember2008Department ofNaturalism és BiologyAdvancedNovember2008Development ofNaturalism és BiologyAdvancedNovember2008Development ofNaturalism és BiologyAdvancedNovember2008Dept.

természettudományi

Szerkesztette: Universidad de Extremadura Caldereros Publications Service 2. 100 emelet Cáceres 10071 E-mail: [email protected] http://www.unex.es/publicaciones

Universidad de Extremadura EANATÓMIA, SEJTBIOLÓGIA ÉS ZOOLÓGIA TANSZÉK Természettudományi Kar Épület Kar Avda.deElvass/n 06071Badajoz Dr. GervasioMartínPartido, az Extremadura Egyetem Anatómiai, Sejtbiológiai és Zoológiai Tanszékének igazgatója, a PhD programért felelős Szervezetek doktori tanulmányai: címe: Az N oligoszacharidok foszforilezésében szerepet játszó Saccharomyces cerevisiae gének azonosítása és funkcionális elemzése, a cord.isa által. Aisaaccorbachocollo a professzor fokozatának megválasztására Dr.Luism.hernándezmartín és Dra irányításával került sor. Isabel Olivero Jiménez, a Baszkföld Orvostudományi Tanszékén, Baszkföld Orvostudományi Tanszékén, az alábbi orvosbiológiai tudományok területén, az Amerikai Egyesült Államok Biomedikai Tudományok Tanszékén és a következő Orvostudományi Egyetem., 2008. június 30. Aláírva: GervasioMartínParty, az Anatómia, Sejtbiológia és Zoológia Tanszék igazgatója

Extremadurai Egyetem DEPARTAMENTODECIENCIASBIOMÉDICAS ÁREADEMICROBIOLOGÍA FacultaddeCiencias EdificioJuanRemónCamacho Avda.deElvass/n 06071Badajoz Orvosok Luis M. Hernandez Martin és Isabel Olivero Jimenez, ProfesoresTitularesdelDepartamentodeCienciasBiomédicasdelaUniversidad deextremadura IGAZOLJA QueellicenciadoD.IsaacCorbachoCuelloharealizadoeltrabajotitulado azonosítása és funkcionális elemzése gének Saccharomyces cerevisiae részt vesz a foszforilációját Noligosacáridos az irányítása alatt, a az Extremadurai Egyetem Orvostudományi Tanszéke (Mikrobiológiai Terület) az orvos fokozatának megválasztása érdekében. És az illetékes bíróság előadásának és értékelésének engedélyezéséhez aláírják ezt a bizonyítványt Badajozban, 2008. június 30-án. Aláírták: LuisM.HernándezMartín professzor, az Orvosbiológiai Tudományok Tanszékének vezetője Aláírták: IsabelOliveroJiménez, az Orvostudományi Tanszék professzora

Rövidítések P Foszfát PAGE Electroforesisengeldepoliacrilamida (PolyacrylamideGelElectrophoresis) bp Pardebases PCR Reacciónencadenadelapolimerasa (polymerasechainreaction) Pi Fostatoinorgánico PKC VíadetransduccióndeseñalesmediadaporPkc1p PMSF Fluorurodefenilmetilsulfonilo Pro Prolin PVC Compartimentoprevacuolar (prevacuolarcompartment) RE endoplazmás retikulum SDS Dodecilsulfatodesodio SDSPAGE Electroforesisengeldepoliacrilamidaencondicionesdesnaturalizantes (SDS PolyacrylamideGelElectrophoresis) Ser szerin SGD BasededatosdelgenomadeSaccharomycescerevisiae (SaccharomycesGenomeDatabase) TEMED tetrametil TFN Ácidotrifluoroacético Thr Treonin (treonin) Tm Olvadáspont Tris Trishydroxymethylaminometan UDP Uridindifoszfát VATPase H + ATPvacuolar membrán passage VPS A vakuolába (vacuoláris fehérje insorting) történő fehérjeszállításhoz kapcsolódó gének VRG-gliláció és a kapcsolódó rezisztenciához kapcsolódó Gglinaldcatermelés és a rezisztenciához kapcsolódó gly mutánsok) 6

Bevezetés 0.3. Ábra. Az endoplazmatikus retikulum Noligosaccharide bioszintézisének különböző lépéseinek sematikus összefoglalása. Az oligoszacharid szintézise azzal kezdődik, hogy egy N acetil-glükózamin-foszfát egy kötött uridin-foszfát (UDP) NAcGlc-ből átkerül a dolichol-foszfát-dandolugaranacglcppdol-ba. Miután egy második NAcGlc-maradék és öt egység mannóz került a citoszolos oldalon Mannose 2 REP., 1980) Még négy mannóz és három glükóz van hozzáadva egy meghatározott reakciósor szerint, specifikus glikoziltranszferázok sorozatán keresztül. Ezeket a transzferázokat genesalg (aszparraginelinkeltglikoziláció) kódolja, amelynek aktivitását az ábra mutatja. A policholhoz kötött heptasacharid transzmembrán transzlokációja biokémiai szempontból nem ismert részletesen; élesztőkben ismert, hogy a műfaj terméke, 2002., 2008. tizenegy

Nettó negatív töltés bevezetése a sejtfelületre, amely előny lehet bizonyos környezetekben, azonban nem sikerült teljesen meghatározni e csoportok pontos funkcióját a bio-szintetikus úton (jigamiyodani, 1999). 0.5. Ábra. A mannosil-foszfát-csoportok elhelyezkedése a Noligosaccharides és Ooligosaccharides-ban. A mannozil-foszfát-akceptor szekvenciákat zöld és piros színnel jelöltük. Ballou és munkatársai 30 évvel ezelőtt készítették az első vizsgálatokat a mannan-foszfát-csoportok noligoszacharidokba történő átviteléről, és két feltétel nélküli, mannan-hibás mutánt izoláltak: mnn4 (Ballou és mtsai, 1973; Raschke és mtsai, 1973) és mnn6 (Karson és mtsai). Ballou, 1978), amely a foszfátcsoportok teljes hiányát mutatta ki a mannoproteinekhez kapcsolt oligoszacharidokban. Ezenkívül létrehoztak egy módszert a mannoszil-transzferáz aktivitás mérésére (Karson és Ballou, 1978), és közvetlen összefüggést hoztak létre a foszfáttartalom és a sejt kationos alkík kék festékkel való affinitása között (Ballou et al., 1973; Raschkeetal., 1973 ).